RT - PCR

소개

세포생물학 실험 관련 레포트입니다.
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목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
-PCR 이란?
-RT-PCR이란?
-실험참고
3.실험 재료
4.실험방법
5.예상결과
6.참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
DNA를 template로 해서 DNA를 증폭하는 일반 PCR과는 달리 mRNA를 template로 해서 DNA를 증폭하는 방법인 RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)을 알아본다.

2. 실험 원리
*PCR 이란?
-PCR의 기본 원리와 과정
PCR(polymerase chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면은 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing extension 이렇게 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다. 그럼 PCR의 각 과정에 대해서 좀 더 자세히 살펴보자.
(a) Denaturation
90°C - 96°C로 가열하여 double strand DNA(ds DNA)를 single strand DNA(ssDNA)로 분리시킵니다. 높은 온도일수록 ssDNA 로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성이 낮아질 수 있으므로 보통 94°C로 합니다. 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킨다.
(b) Annealing
각각 두가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라 붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 정확도를 결정 짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어..

참고자료

· Geoffrey M. Cooper, Cell, 1996, A molecular approach
· Campbell, Biochemistry, Biochemistry, 1999, Harcourt College Publishers
· T.Maniatis, Molecular cloning, 1982, CSH
· http://juyunval.hihome.com/proto/proto-15.htm
· http://cafe.naver.com/gaury.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=13700
· http://user.chollian.net/~serioso/molecular/rtpcr.