PCR, RT-PCR, real-time PCR

소개글

PCR, RT-PCR, real-time PCR의 원리, 방법, 구성요소, 차이점들을 정리해 놓았습니다.

목차

1. PCR (Polymerase Chain Reaction)
1-1. PCR(중합효소 연쇄반응)란?
1-2. PCR원리
1-3. PCR 구성 요소
1-4. PCR 실험방법
1-5. PCR시 고려사항

2. RT-PCR (reverse transcription-Polymerase chain reaction)
2-1. RT-PCR란?
2-2. RT-PCR 원리
2-3. RT-PCR 구성 요소
2-4. PCR 실험방법
2-5. RT-PCR시 고려사항

3. real-time PCR
3-1. real-time PCR이란?
3-2. real-time PCR 원리
3-3. real-time PCR 종류
3-4. real-time PCR 실험 방법
3-5. real-time PCR 결과 해석

본문내용

1. PCR (Polymerase Chain Reaction)
1-1. PCR(중합효소 연쇄반응)란?
• 1983년 Kary Mullis에 의해 고안
• 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법
• 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능
• 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 발견
• PCR을 통한 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수 있음
• PCR 관련 기법 등 PCR 응용분야가 많은 발전을 하고 있음

1-2. PCR원리
• 주형 DNA, DNA 중합효소, primer, 뉴클레오타이드(nucleotide) 필요
• PCR의 시작 재료는 증폭 할 서열을 지닌 DNA임
• 반응에 사용되는 프라이머에 의해 제한되므로 증폭되어질 서열을 분리할 필요는 없음
• PCR에 사용될 DNA의 양은 극히 미량임
• DNA 합성의 개시점을 나타내는 두 개의 프라이머, DNA 중합효소,
4종류의 디옥시뉴클레오타이드 혼합물과 DNA를 mix
• 혼합물을 다음 과정이 계속 반복하여(보통 25∼35회) 원하는 DNA 부분을 증폭시킴
① DNA 의 변성(denaturation)
- 목적으로 하는 두가닥 DNA 단편을 변성시킴
- 90℃∼96℃로 가열하여 두가닥 DNA를 단일가닥 DNA로 분리
- 높은 온도일수록 단일가닥 DNA로 잘 이행됨
- 온도가 너무 높으면 Taq DNA polymerase 역시 activity(활성)가 낮아질 수 있음
- 첫 Cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킴

참고 자료

없음