PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출 결과 보고서

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목차

1. 실험 제목
2. 실험 방법
3. 실험 결과
4. 고찰
5. 결론
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험 제목
PCR 기반 Specific Human DNA 증폭 및 검출

2. 실험 방법
① 1 mL의 protease solution (1/1000로 희석된)을 E.P tube에 넣는다.
② 면봉을 사용해 구강 천장을 긁어 세포를 모은다.
③ 면봉 끝에 모아진 세포를 protease solution에 넣는다.
(면봉을 우측 그림과 같이 짜서 용액을 최대한 모아준다.)
④ Solution을 37℃에서 30분간 incubation 한다.
⑤ 4개의 EP tube에 200μL씩 나눠 담는다.
⑥ 20 μL의 sodium acetate와 500 μL의 100% Ethanol을
⑤에 준비된 용액에 첨가한다.
⑦ Vortexing 후 -80℃에서 15분간 냉각시킨다.
⑧ 15,000 rpm, 4℃에서 15분간 centrifuge한다.
⑨ 상층액을 제거한 뒤 1mL의 70% ethanol을 넣는다.
⑩ 15,000 rpm, 4℃에서 2분간 centrifuge한다.
⑪ 상층액을 제거한 뒤 침출된 DNA를 15분간 상온에서 건조시킨다.
⑫ 100μL의 water로 tube(1)에만 넣어 DNA를 풀어준 뒤, tube(1)의 용액을 다음 튜 브로 옮겨가며 (tube(1)→tube(2)→tube(3)→tube(4)) 나머지 tube의 DNA를 풀어 하 나로 만든 뒤 vortexing 해준다.

참고 자료

PCR protocols : a guide to methods and applications. Innis, Michael A. San Diego: Academic Press.1990
Lundberg, K.S., Shoemaker, D.D., Adams, M.W., Short, J.M., Sorge, J.A., and Mathur, E.J. 1991. Highfidelity amplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus. Gene 108, 1-6.