[A0] 서강대 현대생물학실험2 4차 풀레포트 - GFPuv를 이용한 Site-directed mutagenesis의 실습과 DNA sequencing 결과의 분석 연습

소개글

"[A0] 서강대 현대생물학실험2 4차 풀레포트 - GFPuv를 이용한 Site-directed mutagenesis의 실습과 DNA sequencing 결과의 분석 연습"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

한 학기 동안 다루었던 gene X는 synthetic construct fluorescent protein SGFP2(206A) gene과 99.17% 유사하며, 239개의 아미노산으로 이루어진 GFP superfamily의 단백질을 coding한다. 하지만 한가지 고민해볼 거리가 있다. <Figure 6>에서 볼 수 있듯이 NdeⅠ과 HindⅢ 인식부위 사이에는 두개의 ORF가 존재한다. 첫번째 개시코돈은 학기 초, pGEM-T vector에 삽입된 insert를 NdeⅠ과 HindⅢ로 double cut하면서 gene X에 추가된 부분이므로, 원래 gene X의 개시코돈은 두번째 개시코돈이 맞다. 그러나, 지금 가지고 있는 이 gene X를 실제로 bacteria 내에서 발현시킨다면, 원래의 gene X가 코딩하는 단백질과 동일한 단백질이 발현된다고 말할 수 있을까?
Prokaryote에서 단백질을 합성하는 translation 과정은 mRNA의 ribosome binding site(RBS)에 16S rRNA가 상보적으로 결합하는 것에서 시작한다. 이 결합을 통해 리보솜의 P site에 개시코돈인 AUG가 놓이게 된다. 일반적으로 RBS는 개시코돈에서 5’쪽으로 3-9 bp 위에 존재한다[3]. 따라서 gene X의 sequencing 결과에서 RBS서열이 첫번째 혹은 두번째 개시코돈 바로 앞에 존재한다면, 거기서부터 번역이 시작된다고 볼 수 있다.

참고 자료

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