현대생물학실험2 Report❚ 분반4반❚ 학부생명과학전공❚ 담당 교수❚ 학번❚ 담당 조교❚ 이름GFPuv를 이용한 Site-directed mutagenesis의 실습과DNA s ... 과 DNA sequencing 결과의 분석 방법을 익히는 것이다. GFPuv gene을 site-directed mutagenesis하여 Y66H, Y66H/Y145F 변이를 일으킨 후
시키고, 전자가 ground state로 돌아가며 형광을 방출한다. GFPuv는 GFP variant로, 자외선을 흡수하여 형광을 방출한다. 본 실험은 site-directed ... mutagenesis를 이용하여 GFPuv의 66Y와 145Y를 mutation하였다. Template plasmid는 Dam(DNA adenine methylase)에 의해 5’-GATC ... 된 DNA는 methylation되어 있지 않기 때문에 DpnⅠ에 의해 절단되지 않고 template만이 분해되게 된다. GFPuv와 mutation할 nucleotide를 가진
는 plasmid DNA로, GFPuv gene을 포함하고 있기 때문에 UV에서 많은 형광을 내는 단백질이 발현된다. GFPuv의 chromophore의 아미노산 서열인 65Ser-66Tyr ... -67Gly에서 66번의 Tyr이 His로 돌연변이된 Y66H mutated GFPuv는 파란색을 띄게 되며, Y66H mutated GFPuv에서 chromophore와 상호작용 ... 하는 아미노산인 145번의 Tyr이 Phe로 돌연변이가 일어난 Y66H/Y145F mutated GFPuv는 짙은 파란색을 띄게 된다. sangaer sequencing 방법