식품위생학 - 대장균군 정량 및 정성

소개

식품위생학 실험보고서 중 대장균(E. coli) 및 대장균군(Coliform)의 정량 및 정성에 관한 실험보고서입니다.
식품공전에 따라 표준한천배지, 유당(LB)배지, BGLB배지, EMB배지를 이용하였습니다.
LB 및 BGLB 발효관을 이용한 최확수법, 건조필름을 이용하여 일반세균수 측정에 따라 대장균군을 정량하였습니다. 또, 균 동정을 위해 API kit를 추가적으로 사용하였습니다.

목차

1. 실험의 목적

2. 실험재료 및 기구

3. 실험방법
3-1. LB, BGLB, EMB, NA배지 조제
3-2. 유당배지법에 의한 대장균군 정성 - 추정시험
3-3. 대장균군 정성 - 확정시험
3-4. 대장균군 정성 - 완전시험
3-5. API kit를 이용한 E. coli 동정
3-6. 최확수법에 의한 대장균군 정량
3-7. 건조필름법에 의한 대장균군 정량

4. 실험결과
4-1. 대장균군의 정성
4-1-1. 추정시험
4-1-2. 확정시험
4-1-3. 완전시험
4-2. API kit를 이용한 E. coli 동정
4-3. 대장균군 정량
4-3-1. 최확수법
4-3-2. 건조필름법

5. 고찰
5-1. 대장균군 정성
5-1-1. Lactose Broth
5-1-2. Brilliant Green Lactose Bile
5-1-3. Eosin Methylene Blue Agar
5-2. API kit
5-3. McFarland Standard
5-4. 최확수법(MPN)에 의한 대장균군 정량

6. 요약

7. 참고문헌

Table. 1 시약 및 기구 정보
Table. 2 사용장비 정보
Table 3. 1조 (추정시험 양성 BGLB 배양액) 배양결과 LB, BGLB배지 37℃ 24hrs]
Table 4. 시험관이 3개, 액체시료일 때의 최확수표(3)
Table 5. 1조 (추정시험 양성 BGLB 배양액) 배양결과 EC plate, 37℃, 24hrs]
Table 6. 일반세균수 中, 건조필름법에 의한 1조 대장균군수
Table 7. 식품공전 4.7.2 대장균군 정량시험 가. 최확수법 中 예제
Table 8. 1조 대장균군 정량 및 정성 실험결과 요약

Figure 1. 1조 (E. coli 배양액 & PBS대조군) 배양결과 [LB배지, 37℃ 24hrs]
Figure 2. 1조 (추정시험 양성 배양액) 배양결과 [BGLB배지, 37℃ 24hrs]
Figure 3. 1조 (확정시험 BGLB 배양액) 배양결과 [EMB배지, 37℃ 24hrs]
Figure 4. 1조 (확정시험 BGLB 배양액) 배양결과 [BGLB & LB배지, 37℃ 24hrs]
Figure 5. API 20E 양성, 음성반응, 1조 홍길동, 전형적 E. coli 결과 & Figure 6. 1조 홍길동 API 20E 결과지
Figure 6. 1조 홍길동 API 20E APIweb 분석결과
Figure 7. 전형적 E. coli API 20E APIweb 분석결과

본문내용

1. 실험의 목적
대장균군은 분변유래 오염지표세균으로써 존재 여부를 통해 사람 또는 동물의 변에 의한 오염을 시사한다(1). 또한 양성 판정일 경우, 다른 병원성미생물(기생충, 바이러스, 세균, 특히 인축공통감염병)에 의한 오염 여부를 간접적으로 알아볼 수 있기(1) 때문에 매우 중요한 미생물 시험법이므로 원리와 과정을 학습하고 숙련한다.
대장균군은 Escherichia. coli 를 포함하며 유당을 분해하여 산과 CO2 gas를 발생시키는 통성 혐기성 또는 호기성, 무아포성, 그람음성, 간균의 특징을 갖는 세균군이며 변 중에 항상 배출된다(1). 대장균군 정성은 유당배지법에 의한 추정시험(2), BGLB 및 EMB/Endo배지를 통한 확정시험(2), LB 또는 BGLB배지와 그람염색으로 기포 생성능을 재확인하고 그람음성, 간균임을 확인하는 완전시험(2)으로 구성된다. 여러 가지 생화학적 특성을 알 수 있는 API kit로 균을을 동정할 수도 있다. 대장균군 정량은 접종량별 기포발생관 수를 이용한 최확수법(3)과 3M사의 ECplate를 이용한 건조필름법 세균수 측정(3)이 가능하다.

< 중 략 >

6. 요약
본 실험을 통해 주어진 검체(E. coli 배양액)에 대해 유당배지, BGLB배지, EMB배지, API kit, 최확수법, 건조필름법을 통해 대장균군 정량, 동정 및 정성 실험을 시도하였다.
대장균군 정성에서는 모든 실험에서 양성을 나타내어(그람염색 생략) 검체가 대장균군에 속한다는 것을 알 수 있었다. API kit 실험을 통해 검체가 높은 확률로 E. coli 임을 알 수 있었다. 대장균군 정량에서는 최확수법의 결과, BGLB 및 LB배지에서 >110 MPN/ml, [EC]페트리필름에서는 7.4 * 10⁵ CFU/ml인 것으로 나타났다. 최확수법에서는 최대의 결과인 3, 3, 3, [EC] 건조필름에서도 모든 농도가 TNTC의 결과를 나타내어 좀더 낮은 단계의 희석 농도가 필요했다고 생각된다.

참고자료

· [국내. 저자 없음] 두산백과. 순수과학 > 생명과학 > 미생물 > 세균 > 대장균군(Coliform group)
· http://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000737913 (2019-11-11 방문)
· [국내. 저자 없음] 식품공전. 제 8. 일반시험법 / 4. 미생물시험법 / 4.7.1 대장균군 정성시험 https://www.foodsafetykorea.go.kr/portal/safefoodlife/food/foodRvlv/foodRvlv.do (2019-11-11 방문)
· [국내. 저자 없음] 식품공전. 제 8. 일반시험법 / 4. 미생물시험법 / 4.7.2 대장균군 정량시험 https://www.foodsafetykorea.go.kr/portal/safefoodlife/food/foodRvlv/foodRvlv.do (2019-11-11 방문)
· [외국. 저자 없음] 3M (2019). Product Instructions : 3M Petrifilm Staph Express System.
· https://www.3m.com/3M/en_US/company-us/all-3m-products/~/3M-Petrifilm-Staph-Express-Disk/?N=5002385+3292766750&rt=rud (2019-11-17 방문)
· [외국. 저자 없음] Oxoid Microbiology Products. Lactose Broth
· http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_detail.asp?pr=CM0137&c=UK&lang=EN (2019-11-17 방문)
· [외국. 저자 없음] Oxoid Microbiology Products. Brilliant Green Bile(2%) Broth http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_detail.asp?pr=CM0031&c=UK&lang=EN (2019-11-17 방문)
· [외국. 저자 없음] Wikipedia (2019). Eosin Methylene Blue https://en.wikipedia.org/wiki/Eosin_methylene_blue (2019-11-17 방문)
· [국내. 저자 없음] BioMérieux Korea. API® Manual https://www.microgiene.com:9041/data/item/1473667330/api20E.pdf (2019-11-12 방문)
· [국외. 저자 없음] Wikipedia (2019). McFarland Standards https://en.wikipedia.org/wiki/McFarland_standards (2019-11-17 방문)