식중독세균 동정실험(유전학적 동정법)

소개

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목차

1. Introduction
1) 16S ribosomal RNA 의 사용 및 이점
2) PCR

2. The objectives of this study
1) virulence factor

3. Materials and methods
(1) Materials
(2) Methods
1) Template DNA와 agarose gel 준비
2) PCR 반응
3) 전기영동

4. Results

5. Discussions

6. Reference

본문내용

1. Introduction
중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)은 DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적 기술로 1983년 생명공학 회사 시터스의 연구원 Kary Mullis에 의해 최초로 고안되었다. 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있는 기술이며, 전자동기계를 사용할 수 있어 실험과정이 단순하고 증폭에 필요한 시간이 짧아 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물 분류 등 다양한 분야에서 활용되고 있다. 본 실험에서는 PCR을 이용하여 미지의 시료에서 E. coli 동정을 위한 실험을 실습하고자 한다.

* 16S ribosomal RNA 의 사용 및 이점
16S rRNA는 모든 생물에 존재하는 유전자이며, 따라서 이론적으로 모든 세균 사이의 연관 관계를 밝힐 수 있는 가능성을 가지고 있다는 이점을 통해 특정 관계를 추정하는 잣대로 이용된다(2008. 고관수). 필수적인 부위가 아닌 경우 약간의 돌연변이를 허용하기도 한다.
대부분의 생물의 16S rRNA 유전자가 매우 비슷하기 때문에 특히 그중에서 보존된 지역이 있으며 여기에 전혀 모르는 세균도 프라이머를 이용해 디자인 하면 증폭한 후 염기서열을 분석하면 무슨 균인지 판정이 가능하다.
16S rRNA 유전자를 비롯한 여러 유전자의 염기서열을 이용하여 미동정 세균을 동정하는 것은 기존의 방법을 보완할 뿐만 아니라 더 정확한 동정을 제시할 수 있다는 점에서 아주 유용하다. 또한 배양하기 힘든 세균이나 배양할 수 없는 세균에 대해서도 동정이 가능하다는 면에서 더 많이 활용될 수 있을 것이다. 그리고 이를 통하여 기존에 밝혀지지 않았던 병원균이 발견되는 등 많은 성과가 있어왔고, 앞으로도 그러한 성과가 증가할 것이라 예상한다(2008. 고관수).

* PCR
빠르고 자동화된 기계로 특정 DNA 서열을 증폭시켜 무슨 균인지 파악하는 기계이다. 이점으로는 간편하고, 빠르며 예민하기에 균 재현성, 그리고 동정에 정확하다.

참고자료

· [보고서] PCR이란? Available at : http://compbio.korea.ac.kr/wiki/images/8/82/TakarPCRprotocol.pdf
· [논문] 고관수. 2008. 미동정 균주의 염기서열 분석을 이용한 동정 성균관대학교 의과대학 분자세포생물학교실, 아시아‐태평양 감염연구재단 (ARFID). S 122 Infection and Chemotherapy : Vol.40, Suppl.2 2008 .
· [논문] 박도훈·문지영·김영부. 2007. 설사환자에서 분리한 장출혈성 대장균과 장병원성 대장균의 Enterocyte Effacement 관련 LEE 유전자의 병원형 특성. Journal of Bacteriology and Virology 2007. Vol. 37, No. 2 p.69 – 78
· [보고서] 토착화질환 국가표준화관리사업 2004년도 계획서. 2004. 질병관리본부 국립보건연구원. 장내세균과