Gene cloning에 실험 발표자료(십자화과 채소의 glucosinolate 생성에 관여하는 SGT(s-glucosyltransferase) 의 양을 늘려 glucosinolate의 생산량이 isothiocyanate의 함량에 미치는 영향)

소개

실험의 목적은 십자화과 채소의 glucosinolate 생성에 관여하는 SGT(s-glucosyltransferase) 의 양을 늘려 glucosinolate의 생산량이 isothiocyanate의 함량에 미치는 영향을 조사하는 것이 그 목적이다.

목차

연구필요성
Prep(plasmid isolation)
chromosomal DNA
Plasmid DNA
Vector의 기능
Plasmid DNA의 구조
Plasmid isolation
Solution I
Solution II
Restriction(PS44, pBX)
등..

본문내용

s-glycosyltransferase의
대장균내 발현을 위한 vector construction과 발현
연구필요성
십자화과 채소들은 초식동물로부터 자기자신을 보호하기 위해 glucosinolate/myrosinase System을 사용한다. 이때 glucosinolate는 식물체내의 생물학적 과정에 의해 분해되어 항암물질인 isothiocyanate를 생산하는데 관여한다고 보고 되어져 있다.
본 실험의 목적은 십자화과 채소의 glucosinolate 생성에 관여하는 SGT(s-glucosyltransferase) 의 양을 늘려 glucosinolate의 생산량이 isothiocyanate의 함량에 미치는 영향을 조사하는 것이 그 목적이다.
연구내용
① Prep(plasmid isolation)
② Restriction
③ PCR(polymerase chain reaction)
④ Elution
⑤ Ligation
⑥ Competent cell의 제조를 통한 transformation
⑦ DNA sequencing
Prep(plasmid isolation)
1) 실험 원리
① 박테리아 내의 DNA
chromosomal DNA
plasmid DNA
② Plasmid isolation(plasmid 분리)
2) 실험 재료
① Solution I
② Solution II
③ Solution III
chromosomal DNA
기다란 이중가닥이 histone이라는 단백질을 칭칭 감아서 체내에 존재한다. 이중 가닥 자체도 또한 단순한 linear가 아닌 나름대로 꼬인 입체적인 구조를 가지고 있다.
Plasmid DNA
Chromosomol DNA에 비해 Plasmid DNA는 크기가 작다. 둘을 선형으로 풀어 놓으면 chromosomal DNA가 더 길다. Plasmid DNA는 단백질과 결합되어있지 않은 원형의 닫힌 형태를 가지고 있다.
다른 종의 세포 내에 전달되어 vector의 기능 을 한다.
Plasmid의 구조
Vector의 기능
1) 세포내에서 자가복제(self-replication)를 한다.
2) 항생제를 이용한 선택(selection)이 가능하다.
3) Multi cloning site(MCS)를 이용할 수 있다.
4)vector 부위를 이용한 DNA sequencing, 단백질 발현 등을 할 수 있다.
Plasmid DNA의 구조

참고자료

· 없음