Western blotting

소개

단백질 전기 영동은 세포내의 개개의 단백질 성분을 분리하는 기본적인 기술이라 할 수 있었습니다. 그러나 특정 단백질만을 순수하게 검출하는 데는 이용할 수 없기 때문에 새로운 기술이 필요했고 1979년 Towbin이 새로운 기술을 개발하였습니다. 이 기술은 전기영동을 한 polyacrylamide gel로부터 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 항체를 이용하여 특정 단백질만을 검출 하는 방법 이였습니다. 이것이 western blot의 탄생이라 할 수 있습니다.
DNA를 검출할 수 있는 southern blot, RNA를 검출하는 northern blot, 단백질을 검출하는 western blot은 분자생물학의 중요한 3대 요소를 검출하는 가장 기본적이고 중요한 기술이라 할 수 있습니다.
Western blot은 준비된 sample을 SDS-PAGE를 통해 단백질들을 분리하고, 이 단백질들을 membrane으로 옮기는 과정을 말하며 membrane으로 옮겨진 단백질은 항체를 이용하여 검출할 수 있습니다. 아래 그림은 transfer된 특정 단백질을 검출하는 과정을 나타내는 모식도입니다.

목차

Western blotting
1. Overview
2. Blotting이란?
3. Western blotting의 주요 특징
4. 실험 기기
5. Sample preparation
6. SDS-PAGE & Transfer
7. Antibody & Detection
8. Detection

Southern blotting
1. overview
2. Agarose gel로부터 solid support로 DNA의 이동 방법

Northern blot
1. overview
2. Formaldehyde agarose gel에서 RNA의 전기영동
3. Northern blot hybridization
4. Dot 혹은 slot blot hybridization
5. RNase Protection Assay

Reference

본문내용

1. Overview

단백질 전기 영동은 세포내의 개개의 단백질 성분을 분리하는 기본적인 기술이라 할 수 있었습니다. 그러나 특정 단백질만을 순수하게 검출하는 데는 이용할 수 없기 때문에 새로운 기술이 필요했고 1979년 Towbin이 새로운 기술을 개발하였습니다. 이 기술은 전기영동을 한 polyacrylamide gel로부터 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 항체를 이용하여 특정 단백질만을 검출 하는 방법 이였습니다. 이것이 western blot의 탄생이라 할 수 있습니다.
DNA를 검출할 수 있는 southern blot, RNA를 검출하는 northern blot, 단백질을 검출하는 western blot은 분자생물학의 중요한 3대 요소를 검출하는 가장 기본적이고 중요한 기술이라 할 수 있습니다.
Western blot은 준비된 sample을 SDS-PAGE를 통해 단백질들을 분리하고, 이 단백질들을 membrane으로 옮기는 과정을 말하며 membrane으로 옮겨진 단백질은 항체를 이용하여 검출할 수 있습니다. 아래 그림은 transfer된 특정 단백질을 검출하는 과정을 나타내는 모식도입니다.

2. Blotting이란?

SDS-PAGE가 단백질을 SDS로 (-) 전하를 띄게 한 후 size 별로 분리하는 과정이라면 western blotting은 분리된 단백질을 그대로 membrane으로 옮기는 과정입니다. 이 과정 또한 단백질이 SDS로 인해 (-) 전하를 띄는 성질을 이용한 것으로 gel 쪽을 (-), membrane 쪽을 (+)로 하여 단백질을 전기장을 걸어주어 membrane 쪽으로 이동하도록 합니다.
단백질을 membrane으로 옮기는 것은 많은 단백질 중에서 원하는 단백질만을 항원항체반응을 이용하여 검출하기 위해서 입니다. Gel 내부에 있는 단백질은 항체와 결합할 수 없기 때문에 membrane 위로 단백질들을 옮겨서 항체가 결합할 수 있도록 하기 위해 blotting을 하는 것입니다.

참고자료

· Western Blotting from 유전단백체 기능제어 연구센터
· http://blog.naver.com/blacken628?Redirect=Log&logNo=80047124071
· http://genehunters.co.kr/
· Southern blot
· http://blog.naver.com/challengekt?Redirect=Log&logNo=12706720
· Northern blot ; RNA 분석
· http://blog.naver.com/babystar15/42694753