DEAE Column ion-exchange chromatography를 통한 단백질의 분리

소개글

생명과학 실험을 수강중인 대학생이나 단백질 분리 및 정제과정을 공부하시는 분에게 도움이 될 자료입니다. A+받은 레포트이구요, 조교언니의 칭찬을 많이 받은 레포트입니다.
DEAE column을 이용하였으나 다른 column(beads)를 이용하신 분들도 참고하실 수 있습니다.
전반적으로 ion-exchange chromatography에 필요한 내용들이 많이 있습니다.

제가 직접 그린 그림도 스캔떠서 올렸기 때문에 어디서든 찾을 수 없는 레포트라고 생각합니다.
대부분의 정보는 제가 외국사이트에서 찾아서 직접 번역한 내용으로, 절대 함부로 긁어오지 않았음을 미리 알려드립니다.
실험 과정에서 직접 찍은 사진들도 함께 올라가 있습니다.
Slurry
이 과정에서 교수님의 설명을 참고하여 제가 직접 그려서 올린 그림들이 포함되어 있습니다.
물론 내용도 정리해서 적어놓았습니다.

목차

주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석
목적 : DEAE Sepharoge anion exchange chromatography를 통한 단백질 분리
실험목표 :
실험도구 :
Introoduction
Chromatography
Ion-exchange chromatography
1. 등전점(Isoelectric point)
2. Ion-exchanger
3. Ion-exchange chromatography
Slurry
Method
Result
Discussion
References

본문내용

목적 : DEAE Sepharoge anion exchange chromatography를 통한 단백질 분리
실험목표 : Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.
실험도구 : e-tube 9개, 15㎕ tube 6개, wash buffer (1M Tris-HCl buffer), NaCl buffer (50mM, 75mM, 125mM, 200mM), 스탠드, column, 1ml pipette, ice box, protein mixture, DEAE sepharge (bead) 300㎕, 비커, 실험대

Introoduction

Chromatography

Chromatograph의 ‘chrom’은 ‘색깔’을 의미하며, ‘graphy’는 ‘분리’를 의미한다. Chromatography은 stationary phase와 moving phase로 이루어져 있으며, column을 통과하는 물질이 이들 각각에 흡착되는 정도가 다른 것을 이용하여 그들을 분리해내는 것을 말한다. 주로 stationary phase에는 고체(resin)를, moving phase에는 용매(buffer)를 사용한다.
Column chromatography는 단백질의 전하와 크기, 결합친화력이나 다른 특성의 차이 등을 이용하여 각각을 분리해내는 것이다 .적당한 화학 특성을 가진 구멍이 많은 stationary phase를 원통 내에 채우고 buffer를 흘려보낸다. 그 후에 당백질 용액을 위쪽 부분에 부어 넣으면 matrix를 통하여 스며들어간다. 개개의 단백질은 그 특성에 따라 column 속을 빠르게 혹은 더 느리게 이동한다. 종류로는 이온 교환 크로마토그래피(ion-exchange chromatography)와 크기 배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography), 친화 크로마토그래피(affinity chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high-performance chromatography)가 있다.

Ion-exchange chromatography

1. 등전점(Isoelectric point)
아미노산은 amino group(-NH2)와 carboxylic acid(-COOH)로 이루어진 분자들로, 한 개의 탄소원자에 amino group, carboxylic acid, 수소원자, R group이 결합하고 있는 형태이다. 따라서 아미노산은 양전하(-NH3+)와 음전하(-COO-)를 모두 갖을 수 있는데, 이는 pH에 따라 달라진다. 예를 들어 pH가 낮은 환경에서는 -NH2가 -NH3+꼴로 존재하며, -COOH는 해리되지 않아 전체적으로 (+)전하를 띠게 된다. 마찬가지로 pH가 높은 환경에서는 –COOH가

참고 자료

‘Isoelectric point’에 대한 Wikipedia 검색 - http://en.wikipedia.org/wiki/Isoelectric_point
‘등전점’에 대한 daum 검색- http://blog.naver.com/twice_lie/60043808134
- http://biotechnology.tistory.com/21
Nelson, D, & Cox, M Principles of biochemistry.freeman.
‘DEAE’에 대한 Wikipedia 검색, 그림자료 –
http://www.bio.mtu.edu/campbell/bl4820/lectures/lec6/482w61.htm
‘slurry’에 대한 Wikipedia 검색 - http://en.wikipedia.org/wiki/Slurry