Preparation of Plasmid DNA : Mini-prep.

소개

bateria로부터 plasmid를 분리하는 실험에 대한 레포트 입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Procedure
Ⅲ. Discussion
Ⅳ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction
Plasmid는 Bacterial chormosome에 독자적으로 존재하는 작은 환형의 DNA로서 스스로 복제가 가능하다. Plamid는 몇 개의 유전자를 갖고 있는데, 이들이 baterial cell growth에 필수적이 것은 아니지만 일부는 유전자 조작 과정에서 특별한 역할을 한다. Plsmid는 유용한 cloning vector로 사용되므로 bateria로부터 plamid를 분리해내는 기술은 매우 중요하다. 일반적으로 플라스미드를 분리하는 방법은 alkaline과 detergent를 이용하는 것이다.

Ⅱ. Procedure
1.Incubate bacterial culture (5ml) overnight at 37°C with vigorous shaking
2.Take 1.5ml of culture into eppendorf (EP) tube.
3.Spin down with 6K for 5 min
4.Remove the medium
5.Add 100μl of alkaline lysis solution I & resuspend bacterial pellet with up & down.
6.Add 200μl of alkaline lysis solution II & mix well by inverting the tube.
7.Add 200μl of alkaline lysis solution III & mix well by inverting the tube.
8.Spin down with 13K for 10min.
9.Transfer the supernatant to new EP tube.
10.Add 400μl of phenol:CIAA(1:1) & vortexing.
11.Spin down with 13K for 3min.
12.Transfer upper phase to new EP tube
13.Add 2x volume of 100% EtOH
14.Spin down with 13K for 15min at 4°C
15.Remove supernatant
16.Wash the pellet with 70% EtOH & remove supernatant
17.Air-dry
18.Dissolve the pellet in 20μl of TE containing 20μg/ml of RNase A.
(5번 과정부터 시행하였음)

참고자료

· Daniel Lim, microbiology, The McGrew-Hill Companies, 2nd ed, p.279.