Direct Mutagenesis

소개

Direct Mutagenesis에 관한 모든것

목차

Direct Mutagenesis Procedure

Oligonucleotide-Directed Mutagenesis with M13 DNA

PCR-Amplified Oligonucleotide-Directed Oligonucleotide-Directed Mutagenesis

Random Mutagenesis with Nucleotide Analogues

Error-Prone PCR

DNA Shuffling

Applications of Mutagenesis

본문내용

Direct Mutagenesis
- DNA수준에서 변형을 가하여 아미노산을 만드는 과정
1. Mutagenesis는 protein이나 amino acid를 변화시켜 Mutants를 만드는 것 이다.
2. 단백질을 변형시키는 것은 힘들고 비특이적이다. 대부분의 아미노산은 하나 이상의 코돈을 가지고 있는데다 단백질은 둘이나 그 이상의 아미노산 residues의 결과이기 때문에 같은 단백질이더라도 그 아미노산을 명확히 알아내기란 힘들다.
3. Directed mutagenesis는 특정 뉴클레오타이드만을 변형시키는 것과 짧은 절편을 이용한 것이다.
Direct mutagenesis?
Direct Mutagenesis
Gene
Mutation e.g T→A
Mutation e.g lie→leu
Properties of the
Normal protein
Compare
Properties of the
Mutated protein
기본적인 Directed Mutabenesis를 이용한 Protein Properites의 비교
Direct Mutagenesis
대부분의 amino acid는 하나 이상의 codon을 가지고 있다.
단백질만으로DNA sequences를 알아내기란 힘들다.
Oligonucleotide-Directed
Mutagenesis with M13 DNA
Oligonucleotide-Directed Mutagenesis with M13 DNA
Single-stranded M13에 Mutated Oligonucleotide를 annealing한다.
2. Oligonucleotide를 Primer로 dNTPs 와 Klenow fragment를
이용하여 합성을 한다.
3. T4 DNA ligase로 Nick를 매운다.
4. Transform E.coli
5. Turbid Plaques안에서 original
sequence와 mutated sequence
둘 다 발견된다.
Oligonucleotide-Directed Mutagenesis with M13 DNA
1.Transform ss DNA vector in
dut ung Strain of E. coli
2. dUTPase의 기능이 없다.

참고자료

· 없음