HPLC 정리 리포트

소개글

HPLC 원리, 구조, 작동 원리 및 절차에 관한 그림이 포함된 간략한 리포트입니다.

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본문내용

HPLC는 액체 크로마토그래피로서 이동상을 저장하는 reservoir, 펌프, 인젝터, 컬럼, 디텍터로 구성되어 있다. 펌프에 의해 컬럼에 주입된 혼합물의 성분들은 컬럼을 통과하는 동안 고정상과 이동상간의 분배계수의 차이에 의해 일정한 띠를 형성하며 각 성분별로 분리된다. 크로마토그래피에 있어서의 성공적인 분리 여부는 분리하고자 하는 물질에 대한 적절한 컬럼의 선택과 최적의 이동상을 선택하는데 달려있기 때문에, 이동상의 선택에 있어 용매의 물리적인 성질, 입자와의 상호반응 및 극성 등을 고려해야한다.

HPLC에 있어서 이동상이 갖추어야 할 조건은 사용하려는 디텍터에 적당하여야 하고 불순물을 최대한으로 제거한 순수한 것이어야 한다. 또한 이동상과 분리하고자하는 물질간의 상호작용이 존재하지 않아야 하며, 점도가 적은 것으로 한다. 또한 두 가지 이상의 물질로 이루어진 용액의 경우 두 가지 용액은 잘 섞이는 것이어야 한다. 대상은 반드시 선정된 eluent에 녹아야 하며, eluent는 sample solution의 특성에 따라서 달리한다. Sample solution과 eluent간의 주된 interaction은 diffusion, dipole-dipole interaction, hydrogen bond 및 electrostatic activity 등이다. 분산 상호작용은 인접한 분자사이에는 항상 있을 수 있는 현상으로 sample solution이 순간적으로 dipole moment를 가지게 되면 인접한 eluent분자의 전자를 밀어 내어 sample solution molecule의 dipole을 유도하고 결과적으로 두 molecule(sample solution - eluent)는 전기적인 인력을 가지게 된다. 이러한 interaction이 중복적으로 일어나게 되면 column을 통해서 solution이 각각의 특성에 맞게 detect되는 데에 있어 방해를 받을 수 있다. 그 이외에 eluent 선택에 있어서 고려해야할 점은 경제성이다. Eluent의 선택에 있어서 경제성은 가격이 저렴하며, 물질 자체의 구입이 용의한 것으로 한다. Eluent를 사용하는데있어서 degassing작업은 필수적이다, 만약 degassing이 충분하지 않은 경우에는 detector에서 압력이 낮아지거나 pump의 압력이 변하여 분석에 차질이 생긴다. Degaasing 방법은 감압을 시키거나 가열하는 방법이 있고 이 두 가지 방법을 병행하여도 된다. 최근에는 주로 초음파세척기 내에서 초음파로 진동을 주면서 감압하에서 degassing하는 방법이 많이 사용되고 있다.

참고 자료

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