Ion exchange chromatography

소개

Ion exchange chromatography는 단백질 정제를 할 때 가장 일반적으로 사용되는 chromatography 방법이다.

목차

이론
실험방법
결과
토의

본문내용

1.Introduction
Ion exchange chromatography는 단백질 정제를 할 때 가장 일반적으로 사용되는 chromatography 방법이다. 단백질이 특정 pH에서 net charge가 음의 값을 가지면, 이것은 대게 양의 값을 띠는 음이온 교환기(anion exchanger)에 붙을 것이다. 반면에 양전하를 띠는 단백질은 그렇지 않을 것이다. 음이온 교환기에 붙은 음전하를 띠는 단백질은 1)증가되는 음이온력에 의해 또는 2)pH의 변화에 의해 용리된다.
왜 Ion exchange chromatography에서 등전점(isoelectrc point, pI)가 중요한 지식이 될까?
Ion exchange chromatography을 사용한 단백질 분리 및 정제는 아미노산 표면에 이온함량의 차이가 일차적으로 많은 영향을 준다. 노출된Arginine, histidine, lysine 잔기는 중성 pH에서 대게 양전하를 띠고 aspartic acid와 glutamic acid의 잔기는 음전하를 띤다. 그러므로, 주어진 pH에서 단백질이 순 전하(net charge)을 갖게된다. 낮은 pH에서 순 전하는 더 음의 값을 갖고, 높은 pH에서는 던 낮은 값을 갖게 될 것이다. 양전하와 음전화가 같아지는 pH(즉, 단백질의 순 전하가 0)가 그 단백질의 등전점(pI) 으로 정의 된다. Ion exchange chromatography을 위해서 등전점을 알고 있는 단백질 분리시에는 효력이 있는 pH(단백질의 등전점으로부터 1unit떨어진 정도)를 선별하는 것이 필요하다. 극적인 용리 환경(매우 높은 이온력 또는 pH의 급격한 변화와 같은)을 만들기 위한 높은 전하 필요없이도, 이 pH에서 단백질은 ion exchange column에 붙는데 충분히 높은 순 전하를 가진다.
Goal
(1) Ion exchange chromatography을 이용하여 음전하를 띠는 단백질을 정제 할 수 있다.
(2) 각 fraction의 농도를 알 때, 회수율을 구할 수 있다.
(3) 순 전하(net charge)와 등전점(isoelectric point)을 정의 할 수 있다.
2.Materials and methods
(1)Materals
-DEAE-Sephadex column
-Sample(BSA 1mg/ml)
-Wash buffer(20mM Tris-HCl, pH 8.0)

참고자료

· 없음