[동물발생]Single-step RNA isolation

소개글

동물발생학 실험

목차

Ⅰ. Introduction
1. RNA
2. RNA 분리
A. Guanidinium/cesium chloride 방법
<실험방법>
B. Guanidine HCl 방법
<실험방법>
C. Guanidinium thiocyanate 방법
<실험방법>
D. Poly(A)+ RNA 분리
<실험방법>

(1)RNA 분리의 원칙
(2)RNA 분리과정
3. 노던 블롯팅(Northern blotting)
4. RT-PCR법
Ⅴ. Discussion

본문내용

1. RNA
리보핵산(ribonucleic acid)이라고도 한다. 이 구성성분에서 펜토오스의 당이 리보오스(ribose)일 때 RNA라 하고, 디옥시리보오스(deoxyribose)이면 DNA(deoxyribonucleic acid)라 한다.
①구조
핵산의 단위물질인 뉴클레오티드(nucleotide)가 매우 길게 연결된 고분자 유기물인데, 이 뉴클레오티드는 염기와 탄수화물의 일종인 펜토오스(오탄당), 그리고 인산이 각각 1분자씩 결합한 물질이다.RNA를 구성하는 뉴클레오티드의 4가지 염기는 아데닌(adenine:A)·구아닌(guanine:G)·시토신(cytosine:C)·우라실(uracil:U)이다. 따라서 RNA의 뉴클레오티드에도 A, G, C 또는 U를 가진 네 가지가 있게 된다. 이 뉴클레오티드의 연결방식은 다음과 같다.

여기서 S는 오탄당인 리보오스를, P는 인산을 나타낸다. 위 구조에서 AGC 또는 U의 염기를 가진 네 가지 뉴클레오티드의 배열순서는 무수히 많은 종류가 있을 것이다. 이 뉴클레오티드의 배열순서가 다르면 RNA의 종류도 달라진다. 즉, RNA의 종류라는 것은 뉴클레오티드의 배열순서인 것이다.
②종류
RNA에는 무수히 많은 종류가 있다. 보통 RNA는 뉴클레오티드가 수십에서 수백 개 연결되어 있다. 거의 모든 생물의 유전자는 DNA이지만, 식물에 기생하는 바이러스와 약간의 동물성 바이러스, 그리고 세균성 바이러스는 RNA가 유전자 구실을 한다. 세포 내에서는 주로 리보솜에 들어 있고 일부는 핵 속에, 그리고 인에도 들어 있다.

2. RNA 분리

전형적인 포유동물세포는 약 10-5 μg의 RNA를 함유하고 있다. 이중 80∼85%는 ribosomal RNA (주로 28S, 18S, 5S)이며 10∼15%는 여러종류의 소분자 RNA(transfer RNA, small nuclear RNA 등)이다. 이런 RNA들은 제각기 정해진 크기와 일정한 염기배열 순서로 되어 있으며 전기영동이나 밀도구배 원심분리(density gradient centrifugation) 혹은 ion exchange chromatography등의 방법으로 순수분리할 수 있다.

참고 자료

없음