클로닝

소개

클로닝 실험보고서입니다.

목차

1. Tittle
2. Purpose
3. Principl
4. Materials
5. Methods

본문내용

1. Tittle
Rapid colony transformation of E.coli with plasmid DNA



2. Purpose
형질전환(Transformation)은 유전자 재조합과 밀접한 연관이 있어 현제 다양한 분야에서 응용 및 산업화 되어가고 있다. 이번 실험을 통하여 새롭게 급부상하고 있는 Transformation에 대하여 의의를 알아보고 그 실험 과정을 따라해 보면서 공부해 본다.



3. Principl
a. CaCl2 method
E. coli는 linear 또는 circular DNA를 받아 들일 수 있다. 이러한 과정을 transformation이라 하며 다음과 같은 단계를 거쳐 이루어 진다.E. coli cell이 DNA를 uptake할 수 있는 상태 (competent)로 만들어 주기 위해 E. coli cell을 Ca++과 같은 multivalent ion의 존재하에 0o
C에서 incubation한다. 이때 cation은 E. coli cell membrane에 존재하는 lipid의 negatively charged phosphate와 complex를 이룰 것으로 추정된다. 낮은 온도는 cell membrane을 응고시켜 charged phosphate의 분포를 안정화하여 cation에 의하여 효과적으로 shield되게 하여준다. 이때 37~42oC로 heat shock를 가하면 E. coli membrane 내외의 thermal imbalance가 생겨 DNA가 세포안으로 빨려들어가게 된다.host cell로 들어간 DNA는 ampicillin 내성 유전자 (beta lactamase를 coding하는 유전자)가 포함된 plasmid를 사용하여 ampicillin이 포함된 배지에서 선발한 다음 ampicillin과 tetracyclin plate에 replica하여 recombinant를

참고자료

· 없음