[생화학]Western blot, Southern blot, Northern blot, non SDS-PAGE

소개

blotting method 총 3가지 ( Western blot, Southern blot, Northern blot ) 와 non SDS-PAGE에 관하여 체계적으로 상세히 정리해놓은 리포트입니다. 리포트 작성하시는 데 도움이 되셨으면 좋겠습니다.

목차

1. Western blot
2. Southern blot
3. Northern blot
4. non SDS-PAGE
5. 참고문헌

본문내용

1. Western blot
1) 특징
생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는 데 기본적인 기술
2) 원리
- 여러 가지 단백질을 포함하고 있는 세포 또는 조직의 추출물을 전기 영동하여 그 속에 들어있는 단백질을 크기 별로 구분한 다음 흡착지에 옮겨 놓고 조사하고자 하는 단백의 항체와 결합시켜 그 단백의 존재 유무와 크기 등을 밝히는 검사이다.
- Western blot은 다른 말로 면역블롯팅(immune blotting)이라고도 부른다.
3) 방법
- 과정 1
여러 가지 단백질들을 함유하고 있는 혼합액을 SDS가 포함되어 있는 폴리아크릴아마이드겔에서 전기영동하여 단백질들을 크기에 따라 분리하여 나열시킨다.
- 과정 2
폴리아크릴아마이드겔에 nitrocellulose 또는 nylon 흡착지를 겹쳐 놓고 전기를 걸어 겔속에 있던 단백질들을 흡착지로 이동시킨다. 흡착지를 보합결합 주머니에 넣고 어떤 단백의 항체를 포함한 보합결합 용액과 함께 배양한 후, 다시 그 항체에 대한 항체와 반응시킨다.
- 과정 3
이 때 이차 항체에는 바이오틴이 결합되어 있어서 아비딘이 결합된 페록시다아제와 반응시키면 아비딘-바이오틴의 강력한 결합력 때문에 항원-일차항체-이차항체의 혼합체는 결국 페록시다아제를 가지게 된다.
- 과정 4
과산화수소와 발색제를 함유한 반응액으로 처리하게 되면 페록시다아제에 의하여 과산화수소가 분해될 때 발생하는 발생기 산소는 발색반응을 일으키고 흡착지 위에 존재하는 단백질은 띠모양으로 나타나게 된다.

4) 용도
어떤 단백이 일정한 세포 속에 발현되고 있는가를 확인하거나 그 발현되는 단백질의 크기 변화를 관찰하는 데 이용된다.
5) 단계
Antigen-Antibody reation을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정단백질을 찾아내는 기법으로서 찾고자 하는 단백질에 대한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정단백질의 존재여부를 밝혀낸다. Western blotting은 ELISA에 비해 명확한 테스트이며, 각각의 바이러스의 단백질을 직접적으로 대항하는 항체를 시각화할 수 있게 한다. 따라서 이 방법은 양성 HIV ELISA를 확인하는 테스트로 이용된다.

참고자료

· 프로테오믹스, 범문사, 주현.한진 저
· 단백질 실험노트(上), 김승호, 월드사이언스
· 최신 생화학, 김을상 外 6명, 신광문화사