[A]서강대학교 현대생물학실험4_4차 풀레포트_식물형질전환_full report

소개

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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

식물을 형질전환 시켜 TAG를 발현하는 과정에서 식물 형질전환에 이용되는 agrobacterium tumefaciens와 binary vector에 대해서 이해하고, A.tumefaciens를 competent cell로 만들어 target gene과 eYFP가 포함되어 있는 construct를 이용해 transformation시켜 selection marker를 통해 transformation이 정상적으로 일어난 colony를 선별하고, 담배 식물에 transient transformation을 통해 식물 세포 내 소기관에서 도입된 target gene의 발현을 형광 현미경을 통해 확인하여, WRI1와 DGAT1에 의한 TAG 생합성을 nile red staining를 통해 관찰하고, TLC를 이용하여 TAG를 분리하여 TAG의 생성 기전에 대해 이해하는 목적을 갖는다. 형광 현미경으로 도입한 WRI1, DGAT1, MAGL4, MAGL10의 발현을 관찰하고, 이 protein의 아미노산 서열을 이용하여 PSORT, TargetP, Deeploc website의 세포 내 위치 예상 결과와 비교하였다. nile red staining을 통해 WRI1, DGAT1 gene이 TAG 합성에 관여하는 것을 알 수 있으며, 두 유전자가 동시에 발현될 경우 TAG 합성이 더욱 활발하였다. TLC를 통해 TAG를 분리한 결과에서 WRI1, DGAT1, WRI1+DGAT1 sample 순으로 TAG 합성량이 증가하였으며 nile red staining와 마찬가지로 WRI1+DGAT1 sample에서 TAG양이 가장 많았다. GFP 외에 luciferase나 β-glucuronidase를 이용한 reporter system에 대해 생각해보았으며, TLC에서 TAG 외에 나타난 band에 대해 DAG나 MAG로 추정하였다.

참고자료

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