[A+]서강대학교 현대생물학실험1_4차 풀레포트_항체 생산 & Western blotting analysis

소개

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목차

Abstract
Introduction
Materials & Methods
Result
Discussion
References

본문내용

항원(Antigen)은 Non-self로 인식되는 원인 물질로 체내에 침입하고, 항원을 인식한 면역세포는 항체를 생성한 뒤 세포 외부로 분비한다. 이러한 항체가 항원의 Epitope에 결합하며 병원성을 중화시키며 소멸에 도움을 준다. 즉, 항체는 항원과 특이적으로 결합하는 특징을 갖고 있다. 이후 동일한 항원이 재침입하면 이를 인식한 기억세포가 형질세포와 기억세포로 분화해 더욱 빠르게 항체가 생성된다. 항원을 특정 동물에 주사하여 항체 형성을 유도할 수 있으며, 면역 반응을 촉진하는 Adjuvant를 사용한다. 추가 접종은 첫 접종 이후 최소 7일 이후에 실시하며, 추가 접종 후 3-4주 후에 혈장의 항체 양이 최대치가 된다. 항체 생산에는 주로 쥐(Mus musculus)를 사용하고, 채혈 시 심장 채혈은 동물에게 고통을 동반할 수 있어 안락사를 진행한 다음 혈액을 채취한다. SDS-PAGE를 통해 (-) 전하를 띄는 단백질들을 오로지 분자량에 따라 단백질을 분리할 수 있고, Immunoblotting으로 분리한 단백질에 specific한 항체를 이용하여 특정 단백질의 유무를 확인한다. 6x His tagged eGFP와 Adjuvant를 1:1 비율로 섞은 mixture를 항원으로 일주일 당 150ul 총 3회 접종한 mouse에서 항체를 생산하였으며, 4주차에 혈액을 채취하여 eGFP에 대한 항체가 존재하는 혈청을 얻었다. 이후, GFP 1x (0.5mg/ml), 1/2 x, 1/4 x, 1/8 x sample을 SDS-PAGE를 실시하고 이후 membrane에 transfer 후 mouse에서 얻은 항체를 1차로 이용한 immunoblotting을 통해 최종적으로 보라색 발색반응이 나타난 band를 확인하였다.

참고자료

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