[이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Immunoprecipitation

소개글

이화여자대학교 생명과학실험1 과목 A+ 레포트입니다.
정성 들여 작성했습니다. 참고하시어 좋은 결과 있으시길 바랍니다.

목차

I. Introduction
1. 실험 목적
2. Immunoprecipitation (IP)
① Immunoprecipitation이란?
② Tagged Proteins for IP
③ Application of IP
④ Materials for IP
3. Cloning and Transfection
① Cloning
② Transfection

II. Materials & Methods
1. 실험 도구 (Materials)
① Mammalian Cell Culture
② Transfection
③ Cell Harvest
④ IP
2. 실험 방법 (Methods)
① Mammalian Cell Culture
② Transfection
③ Cell Harvest
④ IP (Immunoprecipitation)

III. Results
1. IP 결과 (사진)
2. IP 결과 (설명)

IV. Discussion
1. 결과 해석
① V5 tagged A protein
② Heavy Chain and Light Chain of Antibody
③ Trouble Shooting
2. 정리

V. References

본문내용

1. 실험 목적
다양한 단백질이 존재하는 용액에서 원하는 단백질만을 분리하는 실험 기법인 Immunoprecipitation(IP) 및 해당 실험 중 필요한 과정인 transfection에 대해 이해하고, 이를 통해 실제로 특정 단백질을 분리한 뒤 검출 결과를 확인한다.

2. Immunoprecipitation (IP)
① Immunoprecipitation이란?
Immunoprecipitation(이하 IP, 면역 침강법)은 antigen-antibody interaction을 이용해 sample 용액으로부터 원하는 단백질을 분리하는 실험 기법이다. 여러 가지 단백질이 섞인 용액에서 특정 단백질만을 분리하고 싶을 경우, 해당 단백질에 specific 하게 결합하는 antibody를 표지로 삼아 이를 얻는 것이다. 이들은 매우 작아 눈에 보이지 않으므로, 눈에 보일 수 있도록 해당 antibody에 specific 하게 결합하는 bead를 이용한다. Bead는 상대적으로 무겁기 때문에 sample 내에서 침강되며, 이를 이용해 원하는 단백질만을 분리할 수 있다.
② Tagged Proteins for IP
만약 target 단백질과 specific 하게 결합하는 antibody가 존재하지 않을 경우, 해당 단백질에 다른 단백질을 tagging 하여 이를 해결한다. Tagging 된 단백질과 결합하는 antibody를 이용하여 IP를 진행하는 것이다. 단백질 tag에는 his tag, Myc tag, HA tag, GST tag, FLAG tag 등의 종류가 있으며, 본 실험에서는 V5라는 단백질을 사용하여 tagging 한다. 이후 해당 V5 tagged protein을 세포 내에서 인위적으로 발현시켜 IP를 통해 얻을 수 있다. 이때 V5 단백질에 대한 antibody는 시중에 널리 보급되어 있으므로 실험에 용이한 특성을 지닌다.

참고 자료

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