A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트

소개

안녕하십니까.

생화학실험 PRE+MAIN 레포트 통합본입니다.
생화학실험 1등으로 A+ 받았습니다.

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목차

1. Title
2. Purpose
3. Theory
4. Chemicals & Apparatus
5. Procedure
6. Data & Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Title
5주차. Transformation

2. Purpose
E. coli의 transformation을 진행한 후, transformation efficiency 계산을 수행한다.

3. Theory
3.1 Competent cell (DH5α)
일반적으로 박테리아는 외부 DNA를 받아들이는 능력이 매우 제한적이다. 이로 인해 자연 상태에서는 transformation이 매우 비효율적으로 일어난다. 이에 효율적인 실험을 위하여 외부 DNA를 더욱 효과적으로 받아들이도록 유전적 변형이 일어난 cell이 필수적이며, 이러한 cell을 competent cell이라 한다. 실험 시 주로 사용되는 competent cells에는 BL21과 DH5α가 있다.
BL21은 ompT protease에 돌연변이가 발생하여 단백질 분해 효소의 기능을 상실하게 된다.
는 단백질 발현 실험에서 특히 중요하게 사용되며, 외부에서 도입된 단백질이 분해되지 않게 한다. 반면, 본 실험에 사용할 DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되어 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제한다. 이는 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 보장한다. 이에 DNA cloning을 비롯한 분자생물학적 기법에서 활용된다.

3.2 Plasmid DNA
Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으면서 자체 복제 능력을 가진 extrachromosomal DNA 분자이다.

참고자료

· Jerem MB, Biochemistry, Freeman, 2015, 8th ed, pp. 870-880, pp. 925~927.
· Layla FA, Mohammed LA, Transformation of Saccharomyces cerevisiae by pET plasmid using lithium acetate, World journal of experimental biosciences, 2015, 3(2), pp. 57~60.