[화공생물공학실험] DNA 제한효소 실험 예비레포트

소개글

동국대학교 화공생물공학실험 2023-2 A+ DNA 제한효소 예비레포트입니다.

목차

1. 실험 목표

2. 실험 원리
1) 생물정보학(Bioinformatics)
2) 제한효소(Restriction enzyme)
(1) I형 제한효소
(2) II형 제한효소
(3) III형 제한효소
3) 전기영동(Electrophoresis)
(1) 아가로스 겔 전기영동(Agarose gel electrophoresis)
(2) Electrophoresis Buffer
(3) DNA staining dye

3. 시약 조사 & 실험 기구 및 방법
1) 실험 기구
2) 실험 시약
3) 실험 방법

4. 실험 시 주의사항

5. 참고 문헌

본문내용

실험 목표
lambda DNA 를 임의의 제한효소를 사용해 절단하고, 이를 전기영동하여 사용된 제한 효소의 기작과 DNA의 대략적인 구조를 알아본다.

<중 략>

실험 방법
(1) 1.5mL micro tube 에 아래와 같이 sample을 제조한다.
① Lambda DNA 5μl + DW 13μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl
② Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme1 1μl
③ Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme2 1μl
④ Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme1 1μl + Restriction Enzyme2 1μl
(2) Micro tube 를 모두 37℃에서 반응시킨다.
(3) DW 49.8ml + 50x TAE buffer 0.02ml 를 dilution 하여 1x TAE buffer 50ml 를 제조한다.
(4) Agarose 1%(w/v)이 되도록 0.5g을 넣어 전체 부피가 50ml인 1x TAE buffer를 제조한다.
(5) 뚜껑을 살짝 닫은 후 agarose가 완전히 녹을 때까지 전자레인지로 가열한다.
(6) 상온에서 식힌 후, 20000x Redsafe를2.5μl 첨가하여 1x가 되도록 용액을 제조한다.
(7) Comb 가 꽂혀진 틀에 agarose를 천천히 붓고 굳을 때까지 기다린다.
(8) 각각의 sample에 6x loading buffer 를 4μl 첨가하여 1x가 되도록 만든다.
(9) 전기영동기에 gel이 잠길 정도로 1x TAE buffer를 넣어준다.
(10) Agarose gel well 에 DNA marker 3μl와 각각의 sample 5μl를 loading한다.
(11) 전기영동기 스위치를 누른 후 gel의 3/4 정도에 Orange G가 오면 멈추고 gel을 UV-transi lluminator 로 관찰한다.
(12) 각각의 결과를 Ape 프로그램을 통해 분석한 후 사용한 제한효소의 종류와 lambda DNA의 구조를 파악한다.

참고 자료

화공생물공학과 교수진. (2023). 화공생물공학실험. 동국대학교 화공생물공학과. 5-8.
박성환. (2022). 아가로스 겔 전기영동에서 간단하고 실용적인 DNA 염색 방법. 산업기술연구논문지, 27(4), 1-7.
윤용덕, & 주이석. (1993). 역전장 전기영동장치를 이용한 대형 DNA 분리에 관한 연구. 대한수의학회지, 33(1), 81-85.
GS, S. Advanced DNA Sequencing Technology.
안전보건공단. http://msds.kosha.or.kr/MSDSInfo/