[1] 실험목적
plasmid라는 염색체 이외의 자가복제 DNA를 분리해서 DNA 추출과 정제 방법의 원리를 배운다. 그리고 DNA의 이화학적 특성을 이해한다.
[2] 실험이론
원핵세포와 진핵세포는 구조와 구성 요소에 차이 가 있기 때문에 유전자를 추출할 때 이를 고려해야 한다. 원핵세포는 핵이 없는 반면 진핵세포는 막으 로 둘러싸인 핵을 가지고 있다. 원핵세포는 진핵세 포와 다르게 막으로 둘러싸인 세포 소기관을 가지 고 있지 않다. 원핵세포의 DNA는 원형이고 세포질에 둘러싸여 있으나 진핵세포의 DNA는 선형의 모양을 가지며 핵 안에 있다. 또한, 원핵세포는 plasmid DNA가 원형이고 세포질 속에 존재하지 만 진핵세포는 plasmid DNA가 거의 없거나 세포 소기관에 존재한다.
Plasmid 는 세균 세포 내에서 염색체가 별도로 존재해 독자적으로 복제하거나 증식이 가능한 원형 DNA 분자를 의미한다. 세균에서 분리해 조작하기 편하고 세포내로도 쉽게 들어간다는 특징이 있다. 때문에 유전공학에서 플라스미드를 세포 밖으로 빼내어 제한효소로 자른 뒤 필요로 하는 유전자를 삽임해 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자 재조합 기술을 사용한다. 플라스미드는 여러 형태를 가지는데 닫힌 원형(closed-circular), 열린 원형(nicked open-circular), 선형(linear), 안정된 원형(relaxed circular), 변성된 초나선(supercoiled denatured)이 있다. closed-circular 는 DNA 가닥이 꼬여 뭉친 상태로 존재한다. nicked open-circular는 DNA가 원형으로 존재하는데 틈이 존재한다. Linear는 말 그대로 직선으로 풀려있으며 양끝에 틈이 존재한다.
제한 효소는 이중가닥 DNA분자의 특 정한 염기서열을 인식해 그부분이나 주 변을 절단 하는 것을 촉매하는 효소이 다. 제한효소는 각각 인식자리라는 특수 한 염기서열을 가진 위치에서 절단을 실행한다.
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