[A+] 서강대 현대생물학실험4 2차 풀레포트 - A. tumefaciens로의 transformation과 eYFP fusion target protein의 sublocallization 및 WRI1, DGAT1 발현에 따른 잎에서의 TAG 증가 확인

소개글

"[A+] 서강대 현대생물학실험4 2차 풀레포트 - A. tumefaciens로의 transformation과 eYFP fusion target protein의 sublocallization 및 WRI1, DGAT1 발현에 따른 잎에서의 TAG 증가 확인"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

Abstract
본 실험은 target gene(eYFP fusion)이 도입된 Ti plasmid를 A. tumefaciens GV3101 strain에 transformation하였으며, 이를 담뱃잎에 infiltration하여 transient transformation하였다. Colony PCR로 target gene이 A. tumefaciens로 잘 transformation 되었는지 확인하였으며, 형질전환 효율은 0.01 μg plasmid DNA에서 가장 높았다. 담뱃잎에서 target protein이 잘 발현되었는지 확인하기 위해 형광현미경에서 발현 위치를 확인하였으며, 동시에 WoLFPSORT와 TargetP 프로그램을 통해 각 target protein의 세포 내 위치를 추정하여 비교하였다

<중 략>

Discussion
A. tumefaciens에 WRI1, DGAT1, MAGL4, MAGL10을 각각 transformation하였으며, 넣어준 DNA의 양(0.01, 0.1,1.0 μg plasmid DNA)에 따른 transformation 효율은 DNA 농도가 낮아질수록 높아지는 경향성을 보였다(Figure 1). 이는 plasmid DNA와 아직 transformation 되지 않은 cell 사이의 접촉확률에 의한 것이다. Plasmid DNA의 양이 적을 때는 plasmid DNA가 transformation 되지 않은 cell과 접촉할 확률이 높으므로 transformation될 확률이 높다. 그러나, plasmid DNA의 양이 많아질수록 먼저 transformation된 cell과 접촉할 확률이 증가하며 따라서, transformation되지 않은 cell과 접촉하여 transformation될 확률이 점차 감소한다. 이는 transformation 효율의 감소로 나타날 것이다.
Target gene이 Ti plasmid에 잘 도입이 되고, 그 Ti plasmid가 cell에 잘 transformation되었는지 확인하기 위해 colony PCR을 시행하였으며, 1200 bp 부근에서 WRI1(1204 bp, 예측값)과 DGAT1(1150 bp), 500 bp 부근에서 MAGL4(527 bp)와 MAGL10(300 bp)가 나타났으므로, 기대한 target gene이 cell 내에 잘 도입됨을 볼 수 있다(Figure 2).

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