[생물학실험] 점 돌연변이의 유발, Site-directed mutagenesis

목차

I. Inroduction

II. Materials and Method

III. Result

IV. Discussion

V. Reference

본문내용

I. Inroduction
1. SDM(Site-directed mutagenesis)
일반적으로 mutagenesis는 x-ray나 chemical을 처리하여 random한 mutant를 얻는 것이 보통이다. 그러나 SDM은 이름에서 알 수 있듯이 원하는 위치에 정확히 mutation을 시켜서 원하는 mutant를 얻는 방법을 말한다.
그러면 어떻게 원하는 위치에 정확히 mutation을 시킬 수 있을까? 우선 SDM을 하기이해서는 mutation을 시키기 원하는 site주변 sequence를 알아야 한다. 그리고 그 sequence중 원하는 부위만을 바꾼 synthetic oligonucleotide를 만든다. 보통 바뀌기 원하는 DNA주변 14bp를 만들고 그것과 상보적인 synthetic oligonucleotide도 만든다. 그 후에 그것을 wild-type dsDNA를 denaturation시킨 것과 함께 넣어주고 renaturation시키면 넣어준 synthetic oligonucleotide가 wild-type ssDNA와 결합하게 된다. 비록 우리가 바꾸기 원하는 하나의 DNA가 바뀌기는 하였으나 양옆으로 상보적인 DNA가 많이 있으므로 별 문제없이 결합을 하게된다. DNA replication에서는 3'-0H기를 가진 primer가 필요한데 바로 synthetic oligonucleotide가 그 primer역할을 하게된다. 그 후에 PCR을 돌려서 amplification시키면 wild-type과 mutant-type이 1:1로 만들어지게 된다.
그 후에는 우리가 원하는 mutant DNA만 고르는 작업을 해야하는데 그것은 restriction enzyme을 이용하여 선별하게 된다.

참고 자료

Weaver, R. F., 2002. Molecular Biology 2nd ed. pp112-115
Weaver, R. F., 2002. Molecular Biology 2nd ed. pp675-676
http://fangman-brewer.genetics.washington.edu/hemimethylation.html
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http://www2.austin.cc.tx.us/microbugz/24mac.html