[생물학, 의학 실험법] In situ hybridization

소개글

유전자 발현위치를 확인하는 실험법에 관한 보고서입니다. 특정 유전자의 발현위치나 염색체상의 특정유전자의 위치를 확인하는 실험법입니다.

목차

Title
Introduction
Methods
Result
Discussion
References

본문내용

Introduction

In situ hybridization은 Detecting이 용이하도록 만든 변형된 nucleotide(DIG-, Biotin-, Fluorescein-dUTP)로 표지 된 probe를 이용하여 Metaphase나 interphase chromosome상의 특정 염색체의 위치를 확인하는데 주로 사용하는 실험 방법이다.(1) 그러나 이번 실험처럼 mRNA의 발현부위를 확인하는데 쓰이기도 한다.
이번 실험에 사용한 DIG-dUTP는 digitalis purpurea와 digitalis lanata라는 식물에만 특이하게 존재하는 steroid인 Digoxigenin을 dUTP와 결합시켜 probe로 사용하는 것으로, Boehringer Mannheim사(Kessler, 1990)에 의해 개발된 것이다. DIG로 label된 probes는 alkaline phosphatase, peroxidase, fluorescein 혹은 rhodamine과 결합된 anti-digoxigenin antibody에 의해 검색된다. 현재는 Digoxigenin-11-dUTP나 digoxigenein-11-UTP가 가장 흔히 이용되고 있다.

참고 자료

(1) http://www.roche-applied-science.com/prod_inf/manuals/InSitu/InSi_toc.htm
(2)http://genetics.snu.ac.kr/doctor/fish/fishreview.html
(3) Lee, S. C. & Hwang, B. K. (2003) dentification of the pepper SAR8.2 gene as a molecular marker for pathogen infection, abiotic elicitors and environmental stresses in Capsicum annuum. Planta. 216(3), 387-96.
(4) Ha S.H., Kim J.B., Hwang Y.S., Lee S.W. (2003). Molecular characterization of three 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase genes including pathogen-induced Hmg2 from pepper (Capsicum annuum). Biochim. Biophys. Acta., 20,1625(3):253-260.
(5) Hong J.K., Hwang B.K. (2002). Induction by pathogen, salt and drought of a basic class II chitinase mRNA and its in situ localization in pepper (Capsicum annuum). Physiol. Plant. 114(4):549-558.