서강대학교 현생실2 Site-directed mutagenesis를 통한 Mutagenic reaction, Transformation과 Sample DNA의 DNA 서열 분석

소개

"서강대학교 현생실2 Site-directed mutagenesis를 통한 Mutagenic reaction, Transformation과 Sample DNA의 DNA 서열 분석"에 대한 내용입니다.

목차

I. Abstract

II. Introduction

III. Materials and Methods
1. Mutagenic PCR
2. Dpnl digestion
3. Transformation
4. DNA sequence 확인

IV. Data & Results

V. Discussion

본문내용

 Abstract
이번 실험에서는 Site-directed mutagenesis를 유발하고, Sample DNA의 Sequence를 분석하는 목적을 가진다. 지금까지 Vector를 이용해 E. coli plasmid에 Transformation을 통해 만든 미지의 Sample을 제한효소인 Ndel과 Hindlll로 절단한 뒤, Agarose gel electrophoresis를 통해 Vector와 Insert DNA를 분리하였다. 그 다음 이 Plasmid DNA를 Sanger sequencing의 일부인 Dye-terminator sequencing을 통해 염기서열을 분석한 뒤, 이 서열을 Finch TV를 분석해, 제한효소 인식부위와 ORF(Open reading frame)를 찾을 수 있었다. 찾은 ORF을 Nucleotide BLAST를 통해 유전자의 정보를 분석하고, DNA 염기서열을 ExPASy site를 통해 아미노산 서열로 변환하여 Protein BLAST를 진행했으며, 이를 통해 이 DNA의 Protein정보를 파악해 Superfamily가 GFP protein임을 알 수 있었다. 실험에 사용된 Sample DNA의 ORF에는 740개의 Nucleotide가 있었으며, 이를 아미노산 서열로 변환한 결과, 247개의 아미노산이 있었다. 또한 Clustal OMEGA site로부터 아미노산 서열을 통해 이번 실험에서 진행한 Site-directed mutagenesis의 결과를 Wild type인 GFP와 Y66H, Y145F의 UV Transilluminator에서의 Colony 형광성질과 서열을 비교함으로써 Mutation이 발생한 지역을 시각적으로 알아보았다.

 Introduction
GFP는 형광을 띠는 단백질로, 빛을 흡수해 전자를 Excitation 했다가 Emission하면서 바닥상태로 갈 때 형광을 띤다.

참고자료

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