생화학실험 Animal cell의 Genomic DNA 추출 및 정량 & Polymerase Chain Reaction(PCR) 고찰

소개

생화학실험 Animal cell의 Genomic DNA 추출 및 정량 & Polymerase Chain Reaction(PCR) 고찰입니다.

목차

1. 시약 및 기구
2. 실험 방법
3. 고찰

본문내용

4. 실험 방법
4-0. Before you begin
① Proteinase K에 1.25mL nuclease-free water 첨가한다.
② W1 & W2 buffer에 absolute ethanol 첨가한다.
③ RNase A에 600uL nuclease-free water 첨가한다.

4-1. Genomic DNA extraction
① 10cm dish에서 배양한 B16F10 세포 (1X104 ~ 1X106)를 centrifuge (3000rpm, 5min) 후, pellet을 제외한 상등액을 제거한다.
② 1X PBS 200μL로 suspension 한다.
③ 20μL Proteinase K를 첨가한다.
④ RNase A 10μL 첨가하고 섞은 후, 2min incubation 한다. (Room temperature)
⑤ 200μL GC buffer 첨가 후, vortex mixer로 섞는다.

< 중 략 >

5. 고찰
이번 실험은 Animal cell의 Genomic DNA추출 및 정량, Polymerase Chain Reaction(PCR)실험을 하였다.
Animal cell의 Genomic DNA추출 및 정량실험은 Genomic DNA에 대해 알아보고 B16F10 세포에서 Genomic DNA를 분리하여보았다. Genomic DNA추출원리는 Absolute 세포용해→DNA정제→DNA농축→Washing→DNA elution이다. 이번실험에서 EtOH는 charge를 띠는 DNA의 물에 대한 친화력을 떨어뜨려 침전시키는 역할을 하고, Phosphate buffer saline (PBS)는 일정한 pH 7.4 유지, 세포의 삼투압과 이온 농도 일치하여 생체 내 농도로 하게 하고 불순물을 씻어낸다. Proteinase K는 DNA의 히스톤 단백질 제거 역할을 하고 그러므로 nuclease에 의한 dna의 분해를 막기 위해 사용된다. RNase A는 RNA 분자 내 phosphodiester 결합 절단 효소, GB buffer는 DNA가 column에 잘 붙을 수 있게 하는 역할을 하고 washing buffer(medium salt)로 RNA, protein, carbohydrate등의 제거가능하다.

참고자료

· [네이버 지식백과] DNA 중합효소 [DNA polymerase] (생화학백과)
· [네이버 지식백과] PCR [polymerase chain reaction] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 강영희)
· [네이버 지식백과] DNA 재생 [Renaturation of DNA] (분자·세포생물학백과)
· [네이버 지식백과] 온도순환기 [Thermal cycler] (분자·세포생물학백과)