전기 영동 겔 제작

목차

1. 실험 목적 및 수업 내용
2. 사용한 기구 및 시약 형태
3. 실험 과정
4. 실험결과 및 고찰
5. 참고자료

본문내용

단백질의 분리 및 정제과정은 보통 여러 단계에 걸쳐 진행된다. 이때 ‘겔 전기 영동(Gel electrophoresis)’의 경우 이름에서 알 수 있듯이 전기를 이용한 분석 방법인데, 틀에 의해 제작된 폴리아크릴아마이드 젤을 이용한다. 폴리아크릴아마이드는 분자형태가 거름망같이 얽혀 있는 형태이며, 관찰하고자 하는 분자들을 거르는 과정을 통해 분리할 수 있다. 이때 폴리아크릴아마이드 젤을 제작할 때, 그 농도를 조절할 수 있는데, 이 농도가 높을수록 그 망의 촘촘한 정도가 높아진다.
이의 원리엔 아크릴아마이드와 비스아크릴아마이드의 농도의 비에 따라 차이가 나는 원리인데, 이 아크릴아마이드와 비스아크릴아마이드 간의 cross linking 형성에 따라 앞서 서술한 거름망이 형성되는 것이며, 검정하고자 하는 단백질의 크기와 분자구조에 따라 해당 망 형태에 의해 빠져나가는 시간과 영향을 받아 분리가 가능해진다.
이때, SDS PAGE의 경우 100-150V의 전압에서 50-90분간 진행되는데, 이때 사용되는 겔은 단백질의 크기가 작을수록(약 4-40kDa) 고농도의 겔(20%)을 사용하며, 이것의 비율은 20%에서 8%까지 다양하게 목적에 맞게 조절할 수 있다.
이때, 검정을 진행하는 단백질은 SDS polyacrylamide gel electrophoresis의 과정을 거쳐 아미노산 1~1.5분자에 sulfate기가 부착되게 되며, 단백질의 pI값에 관계없이 대량의 음전하의 sulfate기가 붙기 때문에 전체적으로 음전하를 띄는 상태가 유지되어 결과적으로 해당 처리과정을 거친 단백질은 molecular weight에 의해 주로 분류될 수 있게 되는 것이다.

참고 자료

https://www.mdpi.com/1420-3049/20/3/5165/htm