[분자생물학실험]Flow cytometry(FACS)를 이용한 cell cycle 분석

소개

실험 과정은 다음과 같다.
1. Permeabilization
2. PI staining

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론 및 원리
1) Flow cytometry
2) PI(Propisium iodide) staning을 통한 세포사멸 검출 원리

3. 실험 기구 및 시약
1) 실험 재료

4. 실험 방법
1) Permeabilization
2) PI staining

5. 실험 결과
1) 4번
2) 12번
3) 3번
4) 17번

6. 토의 사항
1) 실험 고찰

7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
가. FACS의 기본원리를 익히고 적용하는 방법을 알아본다.

2. 실험 이론 및 원리
가. Flow cytometry
1) 유세포 분석기
유액상태의 입자나 세포가 일정 감지 지역을 통과할 때 각각의 입자나 세포를 신속하게 측정하여 세포의 크기, 세포 내부 조성정도, 세포기능 인지등 한 세포가 갖는 여러 특징을 동시에 측정하고 경우에 따라 특정 세포들만을 선택하여 분리할 수 있는 장비이다.

<중 략>

4. 실험 방법
가. Permeabilization
1) 세포를 trypsin-EDTA를 이용해서 떼어낸 후 FACS 튜브에 1㎖ 옮겨 담는다.
2) 300G에서 centrifuge 해준 후 상층액을 제거한다.
3) 약하게 vortex하며 cold 70% ethanol을 넣어 cell fixation 한다.

나. PI staining
1) fixation했던 cell을 300G에서 centrifuge 하여 pellet 만들고 ethanol을 제거한다.
2) PBS를 이용하여 1번 wash 해준다.
3) centrifuge 해준 후 ethanol을 제거한다.
4) PI staining solution을 준비한다. PBS 375 ㎕ + PI 20 ㎕ + RNase A 5 ㎕
5) FACS tube에 준비된 PI 용액을 400 ㎕ 넣고 잘 풀어준 후 차광시켜 보관한다.

참고자료

· 전남대학교 해부병리과, 1996, 유세포 분석기의 원리 및 임상적 이용, 임상병리검사과학회지, 제 28권 1호