plasmid DNA의 분리 및 정제 실험

목차

1. 제목
2. 목적
3. 방법
4. 결과
5. 결론 및 고찰

본문내용

목적
제한효소를 이용하여 plasmid DNA의 분리 및 정제 절차를 알아보고, 전기영동을 이용하여 결과를 확인해 본다.

방법 - Plasmid extraction
1. Bacteria 1ml을 6,000rpm으로 10분간 원심분리한다.
2. 상층액을 버리고 모든 액체를 제거한다. (펠렛만 남김)
3. GET buffer 100㎕를 튜브에 넣고 펠렛 현탁시킨다.
4. 200㎕의 SDS/NaOH용액을 첨가하고, 마이크로튜브를 부드럽게 뒤집어서 섞는다. 섞은 후 실온에서 5분간 기다린다.
5. KOAc 150㎕를 넣고 마이크로튜브를 뒤집어 부드럽게 섞은 뒤 얼음에 5분간 둔다.
6. 튜브를 12,000 rpm으로 5분간 원심분리하여 세포 및 염색체를 침전시킨다.
7. 마이크로튜브의 상층액 400㎕를 조심하여 다른 튜브에 옮긴다.(침전물과의 오염에 유의)
8. 차가운 에탄올 400㎕를 넣고 조심스럽게 섞는다.

참고 자료

김경훈 외 8인. 『대학 생물학 실험』. pp. 126-131.
이길재. 『생명과학 이론과 응용 제8판』. pp. 220-222.