Plasmid DNA isolation from bacterial cell Miniprep 예비레포트 [A+]

목차

1. 실험목적
2. 바탕이론
3. 기구 및 시약
4. 실험방법
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
- DNA isolation 방법 중의 하나인 Miniprep을 이용하여 알칼리 조건 하에서 미생물(대장균)의 세포벽과 세포막을 부수고 유전자 재조합에 필요한 Plasmid DNA를 분리한다.

2. 바탕 이론
(1) Plasmid DNA
- 플라스미드 (Plasmid) 는 생장에 필수적인 염색체 (Chromosome) DNA에서 물리적으로 분리되어 있는 대표적인 에피솜 DNA 분자이다. 1952년 미국의 유전학자 J.레더버그가 최초로 플라스미드를 세균의 염색체 이외의 독자적으로 증식할 수 있는 DNA 분자라고 명명하였다. 박테리아 염색체는 평균 수백만 kb이지만 플라스미드는 대개 1 kb~ 200 kb 이내이며, 원형의 이중가닥인 DNA로 구성되어 있다. 플라스미드는 박테리아의 성장에 꼭 필요한 요소는 아니지만 항생제 내성과 같이 박테리아가 살아가는데 도움을 주는 유전자를 가지고 있다. 플라스미드는 접합이나 형질전환, 형질도입과 같은 수평적 유전자전달에 의해 한 박테리아에서 다른 박테리아로 이동할 수 있다. 또한 유전자클로닝의 벡터로 이용할 수 있어 유전자재조합 DNA기술을 발전시키는데 큰 역할을 하였다.

(2) Miniprep (Minipreparation)
- Miniprep은 DNA isolation 방법 중 하나로, plasmid DNA의 분리에 이용되는 방법이다. 이는 상대적으로 소량의 DNA만을 추출해 확인하는 것이 목적이기 때문에 mini라는 단어가 포함되며, prep이라는 단어는 플라스미드의 준비(plasmid preparation)나 플라스미드 추출(plasmid extraction)의 약자이다. Plasmid DNA를 분리하는 방법에는 다음과 같은 3가지의 방법이 있다.
먼저 화학적인 방법으로 SDS와 pH의 변화를 이용하여 박테리아의 세포벽과 세포막을 부수고 플라스미드 DNA를 얻는 방법인 ‘Alkaline Lysis Mini prep’가 있다.

참고 자료

https://cafe.naver.com/biofactacademy/76 (바이오팩트 공식 학술카페) - Plasmid prep
[네이버 지식백과] 플라스미드 [Plasmid] (분자·세포생물학백과)
김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON, 186page, 210~212page