Component Cell

소개

"Component Cell"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) Competent Cell
2) Competent Cell 종류
3) Competent Cell 제조 원리
4) Competent Cell의 이용
5) 실험 시 주의사항

4. 시약 및 기구
1) 시약
2) 기구
3) 준비

5. 실험 방법

6. 참고사항
1) gylcerol의 역할
2) CaCl₂의 역할
3) LB broth(Luria-Bertani broth)
4) Tris Buffer saline(TBS)
5) Shaking incubator
6) Autoclave(고압멸균)

본문내용

(1) Competent Cell
Competent cell이란 수용성 세포라고 불리며 DNA를 삽입할 수 있도록 처리한 즉, 외부의 DNA를 받아들일 수 있도록 물리적, 화학적으로 처리한 세포를 말한다. 이러한 특징으로 인해 형질전환능력을 가진 세포라고 할 수 있다. 그렇기 때문에 플라스미드(plasmid)에 삽입된 DNA의 전달, 발현 및 유지를 위한 유전자 클로닝에 일상적으로 사용된다. DNA를 삽입할 수 있도록 하는 물리적, 화학적 방법으로는 전기 충격을 가해 DNA를 세포 안으로 전달시키는 방법과 열을 이용한 방법, CaCl₂, RbCl₂ 등을 처리하는 방법 등이 있다.

(2) Competent Cell 종류
① JM109
재조합 클로닝 및 서브 클로닝을 위한 즉시 사용 가능한 유능한 E. coli 세포
• 셀은 바로 사용할 수 있으며 준비 시간이 필요하지 않음
• 변환 효율성 보장
• 원치 않는 재조합 사건 (recA– 돌연변이)에 대한 걱정이 없으며 miniprep DNA (endA– 돌연변이)의 뉴클레아제 캐리오버가 없음

② DH5α
DH5-알파 셀(DH5α, DH5a, DH5-alpha Cells)은 형질 전환 효율을 극대화하기 위해 제작된 대장균 세포이다. DH5α 이름은 미국의 생물학자 더글라스 하나한(Douglas Hanahan)에서 유래한다. 세포는 플라스미드 삽입을 돕는 3개의 돌연변이[1] recA1, endA1 및 청색 백색 스크리닝 을 가능하게 하는 lacZM15에 의해 정의된다. 세포는 수용성상태(competent)이고 종종 원하는 플라스미드를 삽입하기 위해 염화칼슘 형질전환과 함께 사용된다.

참고자료

· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5894228&cid=61232&categoryId=61232
· : competent cell, Electroporation, 실험 시 주의사항
· https://ko.wikipedia.org/wiki/DH5-%EC%95%8C%ED%8C%8C_%EC%85%80 : E. coli (DH5α)
· https://ko.wikipedia.org/wiki/Lb%EB%B0%B0%EC%A7%80 : LB broth
· https://en.wikipedia.org/wiki/Tris-buffered_saline : Tris-HCl
· https://www.addgene.org/protocols/create-glycerol-stock/ : glycerol의 역할
· https://en.wikipedia.org/wiki/Calcium_chloride_transformation : CaCl₂의 역할
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3587675&cid=40942&categoryId=32330 :
· LB Broth
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=422747&cid=60261&categoryId=60261 :
· Shaking incubator
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=16&sst=wr_hit&sod=desc&sop=and&page=1 : competent cell 제조 원리
· https://ko.wikipedia.org/wiki/%EA%B3%A0%EC%95%95%EB%A9%B8%EA%B7%A0
· : Autoclave(고압멸균)
· https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=tritopsh2566&logNo=40153155580&proxyReferer=https:%2F%2Fwww.google.co.kr%2F : Tris-HCl
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3393149&cid=60289&categoryId=60289
· : 대장균과 pH
· https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/EC0114#/EC0114 : BL21(DE3)
· https://www.promega.kr/products/cloning-and-dna-markers/bacterial-strains-and-competent-cells/pro-5_alpha_-jm109-and-hb101-competent-cells/?catNum=L2005
· : JM109
· https://bio-protocol.org/bio101/e76 : RbCl method
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5646963&cid=62861&categoryId=62861
· : 형질전환
· https://bio-protocol.org/bio101/e143 : Inoue Method