Analysis of bacterial metabolites by using High Performance Liquid Chromatograph(HPLC) 결과보고서

소개

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목차

1. 실험 목적 및 이론적 배경

2. 실험 방법
1) 미생물 생장 분석
2) 대사물질 분석

3. 실험 결과
1) Analysis of microbial growth
2) Analysis of metabolites

4. 실험 결과에 대한 분석 및 고찰

5. 결론

6. Reference

본문내용

광밀도 측정방법을 이용하여 세포의 수를 정량하고 이를 생장 곡선으로 나타낼 수 있다. 광
밀도 측정에 사용한 기구는 Spectrophotometer이며, 분자마다 빛을 최대로 흡수하는 파장이
다르다는 원리를 바탕으로 박테리아가 가장 잘 흡수하는 파장인 600nm를 이용해 cell
sample에 대한 OD를 측정한다. 이를 통해 각 생장 단계에서의 실제 미생물 세포수를 정량적
으로 계산해보고, 미생물 생장곡선으로 나타냄으로써 미생물 배양의 기본적인 원리를 알아본
다.
특정 대사에 관여하는 유전자를 조작해 미생물의 대사물질을 조절하여 특정 물질을 생산하거나 제어할 수 있음을 실험을 통해 이해한다. Wild type strain인 E. coli K12 MG1655와 야생형 E.coli의 유전자를 조작하여 pta(phosphate acetyltransferase), ldhA(lactate dehydrogenase), adhE (aldehyde-alcohol dehydrogenase), frdABCD (fumarate
reductase)를 없앤 DSM01 균주와 DSM01균주에 Ethanol production pathway가 새롭게 도입된 균주를 사용하여 aerobic 조건일 때와 anaerobic일때의 대사산물 양상을 분석해 볼 것이다. (frdABCD를 제거한 것은 부산물로 생성되는 Succinic acid를 제거하기 위한 것인데 이번 실험에서 succinic acid의 생산은 고려하지 않았다.)

2.1 미생물 생장 분석
1) glycerol stock 으로 보관된 균주를 LB에 소량 접종하여 seed를 준비한다.
2) Seed를 각각 250mL 플라스크에 계대배양한 후 37℃, 250rpm에서 배양한다.(Working volume: 50ml)

참고자료

· 고려대학교 화공생명공학과, 화공생명공학실험Ⅰ 매뉴얼
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1110579&&anchorTarget=TABLE_OF_CONT
· ENT3&cid=40942&categoryId=32317#TABLE_OF_CONTENT3
· https://ko.wikipedia.org/wiki/HPLC
· https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B6%84%EA%B4%91%EA%B4%91%EB%8F%84%EB%B
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