결과6 Enzyme activity assay 5조

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
해당 실험은 자발적인 광분해를 일으켜 pNPB가 p-NP로 분해되는 과정을 효소CalB 투입을 통한 실험군의 흡광도 및 효소 활성단위(Unit)에 대한 비교‧측정 실험이다. 광분해를 통한 생성물 p-NP가 405nm 파장에서 피크를 보이므로 해당 값을 설정하여 흡광도를 측정하고, 이를 Lambert-Beer의 공식을 활용하여 의 값을 유도한다. 해당 값을 활용하여 최종적으로 효소 활성 단위 을 계산할 수 있다. 본래 실험은 activity(U/mg_enzyme)도 계산해야 되지만 실험에서 mg_enzyme의 값을 알 수 없기 때문에 해당 값은 계산하지 못하였다.
실제 실험 결과, 이론적인 10min 간격이 아는 각 구간별 12~13min 사이로 4번 흡광도를 측정하였고, 추가적으로 초기(0min)가 아닌 효소 반응이 일어난 (2min)를 초기로 흡광도를 측정하였다. 측정 결과, 대체적으로 선형적인 값을 와 에서 보여주고 있지만, 구간 12min에서 흡광도가 음의 값을 가지는 오차가 발생하였다. 해당 오차 원인으로 고려되는 사항은 흡광도 측정 과정의 문제, 효소 반응, 실험실 내 광원에 대한 노출 등으로 고려된다. 추가적으로 의 값이 작은 이유는 효소를 500배 희석하여 사용하였기 떄문이다.
유도하는 효소 활성의 양을 기준으로 계산한다.

⑷Aluminium foil
실험에서 사용하는 pNPB의 경우, 빛에 대한 자발적인 광분해 반응을 일으켜 p-NP로 분해되는 성질을 가지고 있기 때문에, 효소 자체의 반응 특성을 정확하게 비교하기 위해서 해당 반응을 최소화하는 방법으로 사용하는 PNPB를 Aluminium foil로 동봉하여 최대한 밀폐한다.

⑸Shaking incubator
본 실험에서 반응을 최적화할 수 있는 40의 온도 상태에서 반응을 촉진해주는 장치로 사용된다.

참고자료

· 2020년도 생물 화학 공학 이론 및 실험’ 실험 노트
· 오계헌 외 4명, 최신 미생물학 실험 제 2판, 신광문화사, p210~220
· Willey, Sherwood, Woolverton, 미생물학 제9판, (주)라이프사이언스, p137~172, p358~371
· 유주현 외 1명, 응용미생물학실험, 도서출판효일, p211~250