Purification of HIS-TAG fusion protein관련 레포트 (A+자료)

목차

1. HIS-TAG
2. Purification
3. HIS-TAG의 구조 및 정제
4. 참고자료

본문내용

1) HIS-TAG

His-tag은 재조합 단백질 말단에 붙힌 여러 개의 histidine을 가르키는 말이다. histidine은 금속이온에 대한 선택적 결합능을 이용하면 재조합 단백질을 쉬게 분리정제 할 수 있다.
Histidine은 이미다졸기를 가진 아미노산으로 주로 Ni2+ 또는 Fe2+등의 2가 금속이온과 결합을 잘한다. His-tag은 재조합 단백질의 발현벡터를 만다는 단계에서부터 부착 여부를 고려해야 한다. 재조합 단백질 염기서열의 앞부분이나 뒷부분에 여러 개의 histidine이 발현되도록 하는데 보통 발현시키는 histidine의 개수는 6개 이상이다. His-tag은 여러 종류의 숙주세포에서 쉽게 발현시킬 수 있고 짧은 배열의 염기를 붙이는 것만으로도 발현시킬 수 있기 때문에 사용하기 쉽다.

2) Purification

His-tag 재조합 단백질은 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)를 이용하여 쉽게 분리할 수 있다. His-tag을 발현시킨 재조합 단백질이 포함되어 있는 단백질 시료를 Ni2+가 결합되어 있는 gel을 채운 컬럼에 통과시킨 다음 세척 완충액을 컬럼으로 흘려준다. 그렇게 되면 His-tag 재조합 단백질만이 Ni2+에 부탁이 되고 나머지 단백질은 column을 빠져나오게 된다. Ni2+에 붙어있는 His-tag 재조합 단백질은 고농도의 histidine이나 이미다졸을 흘려주면 gel로부터 분리 된다. His-tag 단백질이 Ni-gel에 부착되어 있는 정도를 모르는 경우가 많기 떄문에 His-tag 단백질의 분리조적을 최적화해야한다.

참고 자료

https://translate.google.com/translate?hl=ko&sl=en&u=https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/his-tagged-proteins-production-purification.html
https://madscientist.wordpress.com/2014/07/24/%EB%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88-%EC%A0%95%EC%A0%9C%EC%9D%98-%EC%8B%AD%EA%B3%84%EB%AA%85-4-%EC%B9%9C%ED%99%94%ED%81%AC%EB%A1%9C%EB%A7%88%ED%86%A0%EA%B7%B8
%EB%9E%98%ED%94%BCaffinity-chromatography/
https://spyeyez.tistory.com/entry/Histag-재조합-단백질-분리정제
2019년 3학년 1학기 유전공학 실험 <김영웅>