박테리아 형질전환 및 동결보존

소개글

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목차

I. 목적

II. 서론
1. Transformation
2. Plasmid

III. 실험재료 및 방법
1. 실험재료
2. 실험방법

IV. 결과

V. 고찰

본문내용

목적 :
Plasmid DNA를 이용하여 E-coli를 형질전환 시키고 형질전환이 완료된 E-coli를 cryopreservation으로 장기보관이 가능하게 한다.

서론 :
Transformation
Transformation은외부 유전 물질의 직접적인 주입,결합으로 인한 세포의 유전적인 변화를 말한다. Fredrick Griffith의 폐렴균에 관련된 실험을 통해 처음으로 형질전환 현상이 발견되었다.그 이후의 연구에서 폐렴균의 형질전환을 일으키는 물질이 DNA라는 것을 발견해 DNA가 유전물질이라고 증명했다.
Transformation을 유도하는 방법으로는 electroporation과 heat shock이 있다. electroporation은 electrical field를 형성해 세포막의 투과성을 늘려 화학물질이나 약품, DNA를 세포 내부로 유입시키는 방법이다.매우 많은 수의 세포를 단시간에 처리할 수 있고 세포에 일시적이고 높은 형질전환 효율로 침투시킬 수 있다는 장점이 있지만 특수한 장비가 요구되어진다.
Heat shock 은 세포에 갑작스러운 고온의 온도변화를 주어 세포 내부와 외부의 온도차를 유발한다.이런 온도차로 인해 세포 막에 구멍이 생기게 하고 그 구멍을 통해 DNA가 들어가도록 하는 것이 heat shock의 원리이다.
실험에서 transformation을 위해 특수한 처리가 되어 있는 competent cell을 사용했다.일반적인 세포의 세포막은 negative charge를 가지고 있는 phospholipid로 이루어져 있다. DNA의 phosphate group 또한 negative charge를 가지고 있기 때문에 서로의 전기적 반발력으로 인해 transformation을 위한 세포로의 DNA 침투가 어려워진다.이를 해결하기 위해 CaCl2를 이용해 Ca2+이 세포막의 negative charge를 상쇄시켜 DNA 유입이 쉬운 competent cell을 사용하는 것이다.

참고 자료

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https://en.wikipedia.org/wiki/Transformation_(genetics)
“[Dyne 13th 기초 실험방] Transformation of recombinant DNA into cell”, 다인바이오
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=16&page=2
“형질전환”, 사이언스올
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https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/cloning/cloning-learning-center/invitrogen-school-of-molecular-biology/molecular-cloning/transformation/competent-cell-basics.html
“electroporation”, Wikipedia
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https://www.scienceall.com/%ED%94%8C%EB%9D%BC%EC%8A%A4%EB%AF%B8%EB%93%9Cplasmid/
“cryopreservation”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Cryopreservation
“최대 생존률을 위한 세포 동결 방법”, Avada
http://blog.younginfrontier.com/?p=15172
John Ryan, Ph.D.General Guide for Cryogenically Storing Animal Cell Cultures. Corning Incorporated Life Sciences Acton, MA 01720
“DMSO – Cryopreservation Comes With a Cost”, Cell Culture DISH
https://cellculturedish.com/dmso-cryopreservation-comes-with-a-cost/
“클린벤치가 없을 때 알코올램프로 대신하는 것”, Bric
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=670576