Liquid culture & Expression A+ 실험레포트(결과, 이론)

목차

1. Abstract

2. Experiment
1) 실험 시약 및 장치
2) IPTG (Isopropyl Thiogalactoside)
3) 실험 방법

3. Result

4. Discussion
1) Cell Growth Curve
2) Lac Operon
3) 유도되지 않은 상태

본문내용

1. Abstract
대장균은 외부의 환경을 변화시키는 능력이 없는 불리한 처지를 내부의 유연성으로 만회한다. 유전자 발현의 조절을 통해서 에너지 효율을 최적화하면서 생화학적 유연성을 유지할 수 있다. 따라서 진행생물 유전체에서 유전자 발현의 조절은 매우 중요하다. 이번실험은 이전실험에서 유전자를 조작시켜 고체배지에서 배양한 균 중 독립적으로 Colony를 띄운 표본을 선택하여 액체배지에서 배양시키고 IPTG를 첨가하여 단백질 발현 조건을 충족시키고 이를 확인하는 실험이었다. IPTG는 Lac Operon을 이용한 단백질 발현을 위해 사용되는 유도물질로써 억제인자가 유도물질과 결합하여 작동유전자에 달라붙지 않게 해주는 역할을 함으로써 전사가 일어날 수 있게 해주는 물질이다. Shaking incubator에서 37℃ 로 배양을 시켜주다가 O.D값이 0.6~0.8사이가 될 때 IPTG를 넣어주고 25℃에서 Induction을 시켜주었는데, 이는 세포의 성장을 최소화 하고 eGFP를 더 많이 나오게 하기 위함이었다. 이전 실험에서는 고체배지에서 배양을 시켰지만 이번 실험에서는 액체배지에서 배양을 시켰는데, 고체배지는 균을 자연 상태의 최적의 조건으로 배양하여 균의 활력과 유효성분이 많으나 배양기간이 긴 단점이 있다. 고체배지의 경우에는 미생물의 이동이 저지당해 고립된 Colony를 형성한다. 액체배지의 경우에는 배양기간이 짧아 대량생산에 이용되지만 잡균의 오염이 쉽다. 두 배양을 해준 이유는 고체배지와 액체배지 한 쪽에서만 자라는 균도 있으며 액체배지의 경우 오염되는 경우가 많으므로 두 방법 모두 사용하는 방법이 권장되고 있다.

<중 략>

※ 실험 방법
① Table 1. 의 조성으로 LB배지를 2개 만든다.

② 만들어진 LB배지를 Autoclave로 멸균한다.
(※ 약 121℃, 15psi의 온도와 압력하에서 15분~20분간 처리해준다. 이 과정에서 고온에서도 버틸 수 있는 미생물의 포자까지 사멸된다.)

참고자료

· Willey, Sherwood, Woolverton / 2016 / "미생물학 제9판“ / (주)라이프사이언스 / 137~172p, p358~371
· Benjamin A. Pierce / 2017 / "유전학의 의해 개념과 원리 제 6판“ / (주)라이프사이언스 / p248~260
· “생물화학공학 이론 및 실험노트” 4. Transformation
· 오계헌 외 4명 / 2010 / “최신 미생물학 실험 제 2판” / 신광문화사 / p210~220
· 유주현, 변유량 / 2007 / “응용미생물학실험” / 도서출판효일 / p211~250