포항공대 화생공실험[포스텍 A]Pre-Report (Mini-preparation of Plasmid DNA)

소개글

포항공대 화학공학과 전공필수 과목인 화학생명공학실험 보고서입니다
PRE-Report 는 실험전 사전지식을 정리하는 보고서이고 Final-Report는 실험후 결과를 정리하는 보고서 입니다.
두가지를 모두 참고하셔서 과제에 도움이 되시길 바랍니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 배경지식
4. 시약 및 기기
5. 실험 순서
6. 주의사항
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험 제목 : Mini-preparation of Plasmid DNA

2. 실험 목적
목적 유전가가 insert된 단백질 발현용 벡터를 mini-preparation한다. 또한 재조합 단백질의 cloning을 위한 전반적인 strategy를 이해한다.

3. 이론 및 배경지식
1) 유전자 클로닝에 대한 간단한 소개
유전자 클로닝을 간단히 설명하자면 원하는 DNA부분을 대량으로 복제하는 것이다. 유전자 클로닝의 장점은 매우 적은 양의 DNA 라도 조건만 맞는다면 무한정 복제가 가능하기 때문에 경제적으로 장점이 크다는 것이다. 가장 대표적인 사례로는 인슐린이 있다. 인슐린은 당뇨병 환자에게 필수적인 호르몬인데 체내에서 매우 소량만 합성되기 때문에 클로닝 기술개발 전에는 돼지나 소의 인슐린을 추출하여 사용하였다. 클로닝 기술이 개발된 뒤에는 인간의 인슐린 유전자를 대장균을 통해 복제하여 경제성과 효율성 모두 잡을 수 있었다.

2) 유전자 클로닝의 기본적인 과정
클로닝 과정을 축약하자면 DNA 절단 → 절단 성공여부 확인 → ligation→세균에 집어넣고 복제 → colony로부터 원하는 플라스미드 추출로 나타낼 수 있다. 과정을 좀 더 자세히 보도록 하자.

① Choice of host organism and DNA
가장 먼저 해야 할 일은 DNA와 host를 골라야 한다. 여기서 DNA는 2가지이다. 하나는 복제하고 싶은 DNA 다른 하나는 vector 이다. Vector는 복제할 DNA를 운반해 주는 역할을 한다. Host는 복제될 생물을 의미한다. Host와 DNA들은 무궁무진하게 많지만 사실 cloning에서 쓰이는 것들은 제한적이다. 보통 host로는 대장균을 사용하고 vector로는 plasmid를 사용한다.

참고 자료

Sambrook et al, Molecular Cloning 3rd Ed. Vol.1, Chapter 1
A rapid method for determining sequences in DNA by primed synthesis with DNA polymerase, Sanger Frederick, J. Mol. Biology, 1975, 94, P.441~446