[생화학실험] His–Tag 단백질의 정제 - Purification of His-tagged proteins

소개글

"[생화학실험] His–Tag 단백질의 정제 - Purification of His-tagged proteins"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 토의 사항

본문내용

1. 실험 목적
1.1. 단백질을 정제하는 목적
1.1.1. 가능한 최고의 회수율
1.1.2. 최고의 생물학적 활성 유지
1.1.3. 최고의 순도

1.2. 고려 사항
1.2.1. 정제하고자하는 단백질만 선택
1.2.2. 민감도를 생각해야 함.
1.2.3. 재현성 고려
1.2.4. 검사법 간편
1.2.5. 소요시간과 경비

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 실험 요약
재조합 단백질의 대표적인 예인 His-tag 단백질의 정제 원리와 방법을 이해하고, Ni-NTA 친화크로마토그래피를 수행한 후 His-tag 단백질의 정제 효율을 계산한다. His-tag 는 재조합 단백질 말단에 붙힌 여러 개의 histidine을 가리키며, histidine의 금속이온에 대한 선택적 결합 등을 이용하면 재조합 단백질을 쉽게 분리정제 할 수 있다.
histidine은 이미다졸기를 가진 아미노산으로 주로 나 등의 2가 금속이온과 결합한다. His-tag는 재조합 단백질의 발현벡터를 만드는 단계에서부터 부착 여부를 고려해야한다. 재조합 단백질 염기서열의 앞부분이나 뒷부분에 여러 개의 histidine이 발현되도록 하는데, 보통 발현시키는 histidine의 개수는 6개 이상이다. His-tag는 여러 종류의 숙주세포에서 쉽게 발현시킬수 있고, 짧은 배열의 염기를 붙이는 것만으로도 발현시킬 수 있기 때문에 사용하기 쉽다.

참고 자료

없음