Gene silencing1

목차

1. Introduction
1) 실험원리
1)-1 RNA interference (RNA 간섭)
1)-2 Transfection (형질주입)
1)-3 Cationic lipid-mediated transfection
1)-4 Viral transduction
1)-5 유전자 편집과 CRISPR/Cas9

2. Material
1) 재료
2) 도구

3. Method
1) 실험방법
1)-1 Preparing Vector
1)-1-1 Vector cutting
1)-1-2 Gel electrophoresis
2) Transformation
3)-1 Mini-prep
4)-1 Recutting and DNA electrophoresis
4)-1-1 Recutting
4)-1-2 Gel electrophoresis

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

1. Introduction
1) 실험원리
1)-1 RNA interference (RNA 간섭)
진핵생물 유전자발현의 조절이 대부분 전사 수준에서 일어나지만, 최근의 연구는 전사 후 기작 또한 진핵생물 유전자의 발현을 조절하는 데 중요한 역할을 담당함을 보여준다. 이런 기작의 일부는 작은 비암호화 RNA에 의해 수행된다. 이들 작은 RNA는 mRNA 분자에 존재하는 표적 서열과 결합함으로써 유전자발현을 저해한다. 따라서 이런 유형의 전사 후 유전자발현 조절을 RNA 간섭이라 한다. 대부분의 진핵생물들은 RNAi를 수행한다. RNA 간섭 현상에는 siRNA (small interfering RNA) 혹은 miRNA (microRNA)로 불리는 짧은 RNA 분자가 관여한다. 대략 21에서 28bp 길이의 작은 RNA 분자는 이중가닥 RNA-특이적 엔도뉴클레아제라는 효소의 작용에 의해 긴 이중가닥 RNA 분자로부터 생성된다. 긴 RNA를 작은 조각으로 자르는 이 엔도뉴클레아제 효소는 Dicerfh 불린다. 선충류인 Caenorhabaitis elegans는 단일 종류의 Dicer 효소를 생산하며, 초파리는 두 종류, 애기장대 식물은 최소한 세 종류의 Dicer를 생산한다.

<중 략>

5. Discussion
이번 실험을 통해 플라스미드 DNA추출 (mini prep)과 recut을 통해 DNA 삽입을 알 수 있었다. 또한 RNA 간섭 현상을 통해 knock down 벡터를 사용하여 우리가 원하는 단백질을 감소시키고 분해하여 번역이 되지 못하게 하여 사용하여 RNA 간섭 현상을 이해할 수 있는 실험이었다. 유전자를 플라스미드 벡터로 삽입시키는 가장 간단한 방법은 유전자를 포함하는 외부 DNA와 플라스미드를 동일한 제한효소로 절단하는 것이다. 만일 제한효소가 DNA를 엇갈리게 절단한다면 외부 DNA와 플라스미드 DNA에 상보적인 점착성 말단이 생성된다. 그런 다음 DNA와 플라스미드를 함께 혼합하면 일부 외부 DNA 절편이 플라스미드의 잘려진 말단과 쌍을 이룰 것이다.

참고자료

· D.Peter Sunustad 외 1명, 「유전학원론」, 2013, P541-543, 월드사이언스
· 이난이(2017), “CRISPR/Cas9 시스템 기반 무당질항체 생산용 마우스 제작을 위한 마우스 유래 세포주 NIH-3T3 세포에서의 Ighg 유전자 교정 연구”, 충북대학교 대학원
· 김용훈(2014), “인간 및 소 배양 세포에서 다양한 형질주입 방법의 비교”, 서울대학교
· 강호일 외 1명, 「유전자 치료」, 2003, P180-190, 군자출판사
· 전상학, 「유전학의 이해」, 2009, P214-215, 라이프사이언스