[생화학실험]Western Blotting - SDS-Page

소개

본 Western Blotting은 뉴런으로 분화하기 전인 Neuroblastoma(Ne,신경모세포)를 사용해 신경모세포가 암이 되게 유발하는 단백질을 찾아 보는 실험레포트입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 실험 개요
2.2. 실험 배경
2.3. Western blot 원리

3. 실험 기구 및 시약
3.1. Acrylamide
3.2. Tris-HCl(pH 6.8, pH 8.8)

4. 실험 방법
4.1. 실험 과정

5. 실험 결과
5.1. 결과 DATA

본문내용

1. 실험 목적
1.1. 단백질을 크기별로 분리하는 기술로 항원-항체 반응을 이용하여 전체 단백질에서 특정 단백질만을 Detection 할 수 있다.
1.2. 본 Western Blotting은 뉴런으로 분화하기 전인 Neuroblastoma(Ne,신경모세포)를 사용해 신경모세포가 암이 되게 유발하는 단백질을 찾을 수 있다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 실험 개요
Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)는 단백질을 정제하는 동안 이를 monitor하고, 정제된 단백질의 동질성(homogeneity)을 알기 위한 가장 좋은 방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 단위체의 분자량을 결정하고, 정제된 단백질의 단위체 구성을 알기 위해 사용된다. SDS-PAGE는 더 깊은 연구를 위한 충분한 단백질을 얻기 위해 scale up될 수 있다. 또한, SDS-PAGE와 Isoelectric focusing을 결합시킨 2차원 분석법은 해상도(resolution)가 아주 좋은 방법으로서 하나의 gel에서 수천 개의 polypeptide를 분리할 수 있다.그리고 Blotting method와 결합해서 사용하면 단백질들의 homology를 분석할 수 있다. 이처럼 SDS-PAGE는 단백질 분석에 이용할 수 있는 강력한 수단을 제공한다.

2.2. 실험 배경
Gel electrophoresis에 대한 세부적인 이론이 복잡하고 현재로서는 불완전할지라도, 그 기본적인 개념은 쉽게 이해될 수 있다. 간단히 말해서 전기영동 분석은 전하를 띤 입자들이 외부에서 공급된 전기장의 영향을 받아서 반대 부호를 가진 전극 쪽으로 이동하는 데서 기인한다. 입자들의 움직임은 주위의 molecular sieve로서 역할을 하는 gel matrix와의 상호작용에 의해 지연된다. 전기장의 세기와 gel matrix의 pore size에 따라서 sample 안에 있는 단백질의 이동 속도가 달라진다.

참고자료

· 없음