생화학실험자료 단백질정량

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본문내용

실험 목적
- 단백질 정량 방법 중 하나인 Bradford Assay의 원리를 이해하고 이것을 이용해 미지 시 료에 있는 단백질을 정량한다.
- UV/Vis-Spectrophotometer의 기본원리 및 사용법을 익힌다.

1. 단백질 정량이란
1. 단백질은 모든 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기물로, 생화학에서 가장 기본이 되는 물질 중 하나이자 모든 생물학적 과정에서 역할의 중심을 차지한다. 우리 몸속에만 해도 머리카락, 혈액 속 헤모글로빈, 근육, 여러 가지 효소 등 수많은 단백질로 된 물질들이 존재한다. 이렇게 중요한 단백질을 정량하는 것 역시 대부분의 생화학 실험의 기본이다. 단백질 정량이란 가지고 있는 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요한데, 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭐가 잘못되었다는 것을 알기 어렵기 때문이다. 즉, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로, 간편성 역시 중요하게 여겨진다. 단백질 정량은 크게 두 가지로 나눌 수 있는데 비색정량적(Colorimetric) 방법과 전기영동(Electrophoresis) 방법이 있다. 우리가 할 실험은 비색정량적 방법으로, 미지 시료용액 및 기지 표준용액에 적당한 시약을 가하는 등으로 착색시켜 양자의 색깔의 농도와 색조를 투과광이나 반사광으로 비교하여 정성 또는 정량하는 방법이다.

1. Bradford Assay Bradford Assay는 이번 실험에서 쓰일 방법으로, Bradford protein assay라고도 하고 미국의 과학자인 Marion Mckinley Bradford에 의해 발견되었다. 이것은 UV-Vis Spectrophotometer를 이용해 흡광도를 측정하여 standard 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)를 기준으로 미지 시료에 단백질이 얼마나 들어있는지 측정하는 방법이다. 반응에 참여하는 물질은 크게 두 가지인데, 바로 미지 시료 속 단백질과 단백질을 염색시켜주는 Coomassie brilliant blue dye 이다.

참고 자료

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