서강대학교 현대생물학실험3 Cell migration
- 최초 등록일
- 2018.07.29
- 최종 저작일
- 2018.03
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목차
1. Abstract
2. Introduction
3. Material and Method
4. Data and Result
5. Discussion
6. Reference
본문내용
HaCaT cell을 사용한 이번 실험은 이를 이용하여 세포의 이동에 의해 일어나는 wound healing 과정을 관찰하는 것이었다. Wound healing과정을 관찰하기 위해서는 HaCaT cell을 사용하여 Cell passaging 과정을 거친 뒤에 배양과정을 거쳤으며, cell confluency가 가득 차게 되었을 때 세포의 생장에 필요한 양분의 비율을 낮추어 Cell migration을 관찰하기 적절한 상태로 만들었다. 이후 migration 관찰을 위해 필수적인 조건인 공간적 분리를 만들기 위해 scratch를 냈다. Scratch를 낸 과정 이후에는 관찰을 위해 PFA를 사용하여 cell fixation과정과 0.2% Triton X-100을 이용해 permeabilization과정을 거친 후, F-actin의 관찰을 위해 Phallodin-TRIC staining solution을 사용하여 반응 시킨 후 DAPI를 첨가한 결과물을 바탕으로 형광 현미경으로 관찰하였다. 관찰 결과 DAPI로 관찰한 경우 핵형이 관찰되었으며, Phallodin-TRIC로 관찰한 결과 돌출된 형태로 filopodia와 lamellipodia가 관찰되었으며, 이 둘을 겹쳐서 관찰한 경우 핵을 중심으로 주변부로 actin구조가 관찰되었다. 또한 Phallodin-TRIC로 다른 부분을 관찰한 경우 돌출부가 보이는 경우와 다르게 매끄러운 형태가 보였다. 이는 cell migration이 제대로 일어나지 않을 것으로 보인다. 형광 현미경으로 관찰한 결과가 아닌 Scratch assay로 관찰한 경우 Scratch 직후의 경우에는 Scratch된 주변의 세포의 형태가 다른 세포와 큰 차이가 없었으나 24시간 후 관찰한 세포들의 경우 Scratch 주변 세포들의 형태가 구형에서 뾰족한 형태로 변화하였다.
참고 자료
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