Competent cell preparation실험-예비,결과,레포트,보고서

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험방법
5. 준비 및 참고사항
6. 결과 및 고찰
7. 출처

본문내용

a. 형질전환(Transformation)
- 유전자 재조합의 일종. 외부 DNA를 세포 내에 삽입하여 세포가 원래의 형질 외의 다른 형질을 갖도록 전환시키는 것을 말한다.
- 박테리아의 transformation에는 electroporation, CaCl- -heat transformation, 그리고 conjugation 등이 있다. electroporation은 CaCl- 를 이용하는 방법보다 효율이 훨씬 높지만 이 방법을 이용하기 위해서는 electroporator를 갖추고 있어야하므로 제한이 있으며 대부분의 경우 CaCl- -heat transformation을 이용하여 E. coli를 간단하게 형질전환 할 수 있으며 이 때 competent cell이 필요하다.
b. Competent cell(형질전환 세포)
- 용이한 형질전환을 위해 정상적인 세균에 물리적, 화학적 처리를 하여 외부 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 세포를 말한다.
- Circular 형태의 Plasmid의 증폭, 혹은 cloning을 끝내고 완성된 vector(자기증식능력을 가진 매개자DNA)의 expression 하기위해 목적하는 DNA를 E. coli competent cell에 transformation 할 수 있다.
- Competent cell 제조방법에는 우리가 다루게 되는 CaCl- method 이외에도 Hanahan method, Rubidium method, Inoue method 등이 있다.
① competent cell 기본 제조 원리
E. coli cell이 외부의 DNA를 흡수하기 위해서는 외부 DNA가 세포막 주위에 존재해야 한다. DNA는 phosphate(인산)에 의해 (-) charge를 띠며 세포막 또한 diacylglycerol이 (-) charge를 띠기 때문에 서로 척력이 발생하게 된다.
따라서 이를 중화시키기 위해 divalent cation(2가 양이온: Ca, Rb) 등을 사용한다.

참고자료

· 『두산백과』, ‘형질전환’
· 『해양과학용어사전』, ‘Competent cell’
· 유전단백체 기능제어 연구센터, http://www.genehunters.co.kr/Training/