HPLC의 기본원리와 분석법

소개

분석화학실험 수업에서 다루는 HPLC입니다.

실험 세미나에서 사용할 수 있는 핸드아웃입니다.

목차

1. 액체크로마토그래피
2. 이동상(용매)
3. 고정상(컬럼)
4. HPLC 기기 명칭
5. 원리
6. 용리법
7. HPLC의 분리 메커니즘에 의한 분류
8. 정상과 역상 크로마토그래피
9. HPLC를 이용한 정량/정성 분석방법
10. Reference

본문내용

1. 액체크로마토그래피? HPLC???
크로마토그래피는 혼합물의 성분물질을 이동상과 고정상을 이용하여 분리하는 방법이다. 액체크로마토그래피(Liquid Chromatography)는 이동상으로 액체를 사용한다. 그 중에서 가스크로마토그래피와 비슷한 성능을 내는 것이 HPLC(고성능액체크로마토그래피)이다. HPLC는 시료를 포함하고 있는 액체(이동상)를 고압으로 주입하여 컬럼(고정상이 들어있는 곳)을 통과시킨다. 이때 이동상과 고정상의 친화도에 따라 컬럼을 통과하는 시간이 달라진다. 이러한 화학물질을 검출기를 이용하여 시간대별로 측정하여 화학물질을 분리, 정량하는 방법이다. 미량의 시료를 신속하게 분석할 수 있으며 재현성 있는 분석이 가능하다. 그리고 분석과정이 자동화 되어있기 때문에 간편하다.

2. 이동상(용매)
시료와 함께 컬럼을 통과하는 용매역할이다. 이동상은 시료를 용해시켜야 하므로 극성용매부터 비극성용매까지 용해도를 고려하여 선택해야한다. 그리고 컬럼의 특성도 고려하여 선택하여야 한다. 일반적으로 극성컬럼을 사용할 때는 비극성 유기용매를 사용하며, 비극성컬럼을 사용할 때는 극성 완충용액이 포함된 용액을 사용한다. 자주 사용되는 용매는 메탄올, 물, 아세토니트릴, 핵산이 있다. 하지만 단일용매를 사용하는 경우는 비교적 적고 여러 용매를 혼합하여 사용하는 경우가 많다.

-이동상(용매)의 조건
① 용매는 시료를 용해시켜야 한다.
② 용매는 순도가 높아야한다.
③ 용매의 점도는 0.5이하로 낮아야 한다.
④ 두가지 이상의 용매를 혼합해서 사용하는 경우 두 용매는 반드시 섞이는 것이어야 한다.
⑤ Miscibility Number가 1미만이어야 한다.
⑥ 분리를 위해서 선택된 용매는 컬럼 속의 충진물을 녹여서는 안된다.
⑦ 용매는 분석 대상 물질에 따라 달리 선택한다.
⑧ 선정된 용매의 UV cutoff, Reflective index 값은 낮아야한다.
⑨ 사용하는 용매의 b.p가 너무 낮은 경우, 기포 발생의 소지가 있으며, 반대로 b.p가 너무 높은 경우 분리능이 나빠진다.

참고자료

· http://blog.naver.com/lovecat2010/10080977084
· http://www.nics.go.kr/contents/page.do?m=700000810&homepageSeCode=crop_info&contentsId=324
· http://cafe335.daum.net/_c21_/bbs_search_read?grpid=Tqr7&fldid=APdo&datanum=3&contentval=&docid=Tqr7APdo320030312113127
· 최신분석화학, Daniel C. Harris, 김강진 외, 자유아카데미, 4th edition 2009, p492~p503
· http://terms.naver.com
· https://chem.libretexts.org/Core/Analytical_Chemistry/Instrumental_Analysis/Chromatography/High_performance_liquid_chromatography