단백질의 정량 방법 & 컬럼 크로마토그래피 종류

목차

I. 단백질의 정량방법
1. Kjeldahl 법
2. biuret 법
3. Phenol 시약법
4. Lowry 법
5. 자외선 흡수 spectrum 법

II. 컬럼 크로마토그라피
1. 이온교환크로마토그라피
2. 흡착컬럼크로마토그라피
3. 겔 여과 크로마토그라피
4. 친화크로마토그라피
5. 전기영동

본문내용

1. Kjeldahl 법
1) 원리 : 단백질은 16%의 질소를 포함하므로, 식품 중의 단백질 함량을 알기 위해서 질소의 양을 측정하여 단백질 계수 6.25를 곱하여 구한다. 이 구해진 단백질의 양을 조단백질이라고 하는데, 식품 중에는 단백질에 포함 된 질소 뿐 아니라 비단백질소(NPN)도 포함되어 있기 때문이다. 단백질 함유 시료에 H2SO4를 가하면 유기물이 탈수분해되어 질소가 암모니화하여 황산암모늄이 된다. 이를 희석하여 NaOH를 가해 가열하면 NH3 (암모니아가스)가 증류되어 나오는데 이때 NH3를 다시 H2SO4로 포집하여 황산 암모늄으로 만들고 잔존하는 H2SO4의 양을 NaOH로 역적정하여 암모니아(질소)의 양을 구한다.

2) 실험방법 : Kjeldahl 분해법의 4단계
1. 분해 (시료분해액 만들기)
① 실험 할 시료의 양을 계산한다.
Ex) 단백질을 10% 함유한 밀가루에서 질소 2mg을 측정하기 위해서 필요한 시료의 양은?
2mg x 6.25 x 10 = 125mg
② 밀가루를 0.1 – 0.2mg 측정하여 유산지채로 킬달플라스크에 넣는다.
③ 여기에 분해촉진제 1-2g과 비등석을 넣고 H2SO4 20-30ml를 넣어 가열, 분해한다.
* 분해촉진제 : 황산구리+황산칼륨 (1:4)
* 비등석 : 끓어 넘침을 방지
④ 흑갈색 -> 황녹색,청색이 될때까지 분해한다.
⑤ 메스플라스크에 담고 100ml까지 증류수를 넣어 mess up 한다.
⑥ 이 중 10ml를 취해 실험에 사용한다.
분해식 : 시료중의 질소 + H2SO4 -> (NH4)2SO4 + CO2 + CO + H2O + So2
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2. 증류 (& 중화)
* 통상적인 질소(2-3mg) 또는 그보다 적은 질소를 함유한 시료의 경우 킬달플라스크에서 분해한 그대로 증류수를 20ml 넣어 바로 킬달장치에 설치하여 실험을 진행하고, 많은 질소(20-30mg)을 포함한 시료의 경우 깔때기를 통해서 넣어준다.

참고자료

· 없음