BCA

목차

1. Subject
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Subject
Concentration Determination of Proteins
(BCA 정량법을 이용하여 미지의 단백질을 정량해보자.)

2. Introduction
BCA정량법을 이용해서 미지의 단백질의 농도를 알아보자, BSA(Bovine Serum Albumin)을 이용해 Standard Curve를 구하고 이를 이용해 미지의 단백질의 농도를 구한다.
① BCA(Bicinchoninic acid) 정량법
ⓐ BCA(Bicinchoninic acid)
Bicinchoninic acid는 2개의 carboxylated quinoline ring 구조로 되어있는 약산이다.
Bicinchoninic acid는 생화학자들이 용액의 단백질 농도를 결정하기 위해 BCA 분석실험에 자주 사용하는 물질이며 이 실험과정에서 2개의 bicinchoninic acid chelate는 1개의 Cu1+이온과 결합하여 562nm 파장의 빛을 강하게 흡수하는 물에 녹을 수 있는 보라색 complex를 형성한다.

[BCA의 구조]
ⓑ BCA 정량법
1985년 Paul K. Smith가 BCA 단백질 정량법을 도입했다. 그때부터 단백질의 총량과 색채계 탐지 방법중 가장 널리 쓰이게 되었다. Modified Lowry Protein Assay와 Coomassie dye를 기본으로 둔 정량법과 비교했을때 5%까지 계면활성제를 포함한 샘플에도 쓰일수 있다는 장점이 있다. 단점은 구리를 환원시키는 물질이 BCA 단백질 정량법에서 또한 색깔을 나타내므로 단백질 정량의 정확도에 영향을 미치게 된다. 그리고 구리킬레이트 화합물도 영향을 미치며, 특정한 single amino acid(cysteine or cystine, tyrosine and tryptophan)또한 BCA 정량법을 방해하며 색깔을 내게 된다.

참고 자료

한국 생화학회(1999), 실험생화학 개정 3판, 탐구당, 서울, pp.171~184,197~206
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elchem.kaist.ac.kr/ vt/chem-ed/spec/beerslaw.htm
http://www.schoolscience.co.uk/content/5/chemistry/proteins/Protch2pg5.html