[생화학실험] 환원당 정량

*영*

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◈ 실험원리 및 목적
환원당에 의해 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)가 환원되어 생성된 3-amino-5-nitrosalicylic acid의 흡광도를 측정하여 당을 정량한다. 당의 환원력은 당의 종류에 따라 차이가 있고 반응 조건에 따라 다르므로 상대적인 양의 함량만을 측정할 수 있다. 이 반응은 알칼리성에서 잘 일어난다.
◈ 시약
- DNS 시약 : 증류수 1,000 ml에 7.5g의 DNS와 14.0g의 NaOH를 녹인 다음, 216.1g의 Rochelle 염, 5.4ml의 페놀 및 5.9g의 Na2S2O5를 넣고 녹인다. 잘 녹지 않거나 필요한 경우 추가의 NaOH를 넣어주어도 상관없다.
- 표준 당 용액 : 10g 의 glucose를 증류수 100ml에 녹여 농도가 100mg/ml의 용액을 만든 다음, 이 용액을 적당히 희석하여 증류수 1ml당 0.01-1.0mg의 glucose를 함유하는 용액을 각각 10ml씩 만든다.
ex) 0, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0mg/ml
◈ 실험방법
(표준곡선의 작성)
- 각 농도별 표준 당 용액 1ml에 3ml의 DNS 시약을 넣고 5분간 끓인 후 상온에서 충분히 식힌다.
→ 충분히 식힌 후 흡광도를 측정한다. (이때 만약 시료의 흡광도가 너무 높이 나오면 적당히 희석하여 다시 측정하도록 한다.)
→ 측정 값으로 표준곡선을 작성한다.

참고 자료

생화학실험서 생물화학연구회 동명사 1985
실험생화학 한국생화학 편찬위원회 탐구당 1994

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