E-coli Plasmid DNA 정제 실험 보고서

소개글

플라스미드를 이용한 dna 의 분리정제실험입니다

목차

1. 서론
2. 실험재료
3. 실험과정
4. 실험결과
5. 고찰

본문내용

1) 플라스미드(plasmid) 란?

플라스미드는 외부염색체 DNA분자를 작은 염색체로 전이 이동시키는 것이다. 정의에 따라 플라스미드는 복제단위(replicon)로써 외부염색체 상태에서 안정적으로 유전되는(특별한 분리 없이 유지되는)물질 이다. 전부는 아니지만 대개의 플라스미드는 세포의 생존에 꼭 필수적인 것은 아니다. 그러나 항생제가 존재하는 여러 경우에서는 생존에 필수적인 존재가 되기도 한다. 플라스미드의 기본적 특징은 다음과 같다.

* 세포내에서 염색체와는 독립적으로 존재하는 환상의 DNA이다.
* 세균의 항생제에 대한 저항성은 세균이 갖고 있는 플라스미드에 기인된다.
(선발표지로 이용된다.)
* 모든 플라스미드는 복제 개시점(origin of replication)이 될 수있는 적어도 한 개의 DNA 염기서열을 갖고 있어 세포내에서 세균의 염색체와 독립적으로 존재한다.
* 작은 플라스미드는 복제시 염색체의 효소를 이용하지만 큰 플라스미드는 자체에 복제효 소를 가지고 있다.
* 어떤 플라스미드는 세균의 염색체 속으로 플라스미드를 삽입시켜 복제 될 수 있다. --> 통합적 플라스미드 또는 episome이라고 한다. (세포가 분열해도 안정적으로 다음으로 유 전된다)--> 박테리오파지 염색체의 중요한 특성.

<중 략>

이번 실험은 alkaline lysis method를 이용한 대장균의 plasmid DNA를 정제하는 실험을 해보았는데, Solution I을 통해 세포벽을 깨고 세포막을 유지하도록 하였으며, Solution II를 통해 chromosomal DNA와 단백질을 변성시키고, Solution III를 통해 plasmid DNA를 안정화 시키며 실험을 수행하였다.

실험 결과를 보면 size marker가 불분명하기 때문에 얻어낸 plasmid DNA의 크기를 알 수가 없었다. 전기영동 사진을 보면 결과가 하나의 band로 나타났는데 이를 통해 다른 DNA가 섞이지 않고 잘 분리해냈다는 것을 확인할 수 있었다.

참고 자료

분자생물학노트 제3판 - kist생명공학연구소
유전학의 이해 - rober H. Tomarin 라이프사이언스